益氣活血方通過(guò)“oxLDL-SRS-巨噬細(xì)胞”途徑影響動(dòng)脈粥樣硬化斑塊易損性的機(jī)制.pdf

1、研究背景：
　　益氣活血方寧心痛顆粒是臨床治療冠心病不穩(wěn)定性心絞痛的有效中藥制劑，可抑制易損斑塊內(nèi)炎癥因子的表達(dá)，減輕炎癥反應(yīng)，穩(wěn)定斑塊。巨噬細(xì)胞通過(guò)SRs攝取oxLDL，是形成泡沫細(xì)胞的關(guān)鍵，泡沫細(xì)胞聚集形成大塊的脂肪最終導(dǎo)致粥樣斑塊易損性增加。巨噬細(xì)胞是動(dòng)脈粥樣硬化及易損斑塊形成的重要靶細(xì)胞，寧心痛顆粒在細(xì)胞水平穩(wěn)定斑塊的作用機(jī)制尚有待深入研究。
　　目的：
　　觀(guān)察寧心痛顆粒對(duì)THP-1源性巨噬細(xì)胞攝取oxLDL

2、形成泡沫細(xì)胞過(guò)程中關(guān)鍵的SRs(SRA/CD36/ABCA1)表達(dá)情況的影響，進(jìn)一步探討其干預(yù)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊易損性的機(jī)制。
　　方法：
　　THP-1細(xì)胞經(jīng)160nM的PMA誘導(dǎo)分化成巨噬細(xì)胞，按以下分組:①空白組，即巨噬細(xì)胞組;②對(duì)照組，即泡沫細(xì)胞組，由巨噬細(xì)胞加oxLDL而形成;③寧心痛顆粒有效組分及含藥血清干預(yù)組:分別給予APS、LIG、APS+LIG、寧心痛顆粒含藥血清加oxLDL（含藥血清組另設(shè)空白血清作對(duì)照）;

3、④陽(yáng)性對(duì)照組:α-toc加oxLDL;⑤陰性對(duì)照組:DXM加oxLDL。用油紅O染色觀(guān)察巨噬細(xì)胞泡沫化細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的變化，酶法及高效液相色譜法檢測(cè)泡沫細(xì)胞生成率，WB法檢測(cè)SRs（SRA/CD36/ABCA1）及其通路中關(guān)鍵蛋白LXRα/PPARγ的表達(dá)情況。
　　用PPARγshRNA Plasmid抑制THP-1源性巨噬細(xì)胞PPARγ的表達(dá)，分別給予APS、LIG、APS+LIG、寧心痛顆粒含藥血清加oxLDL，再用上述實(shí)驗(yàn)方法

4、檢測(cè)巨噬細(xì)胞泡沫化的改變。
　　結(jié)果：
　　1、寧心痛顆粒益氣作用的組分黃芪多糖較對(duì)照組能明顯下調(diào)巨噬細(xì)胞CD36，上調(diào)ABCA1、PPARγ(P＜0.05)，抑制巨噬細(xì)胞對(duì)oxLDL的凈攝入，減少泡沫化。
　　2、寧心痛顆粒活血作用的組分藁本內(nèi)酯較對(duì)照組能明顯下調(diào)巨噬細(xì)胞CD36，上調(diào)ABCA1、PPARγ(P＜0.05)，抑制巨噬細(xì)胞對(duì)oxLDL的凈攝入，減少泡沫化。
　　3、黃芪多糖合藁本內(nèi)酯較對(duì)照組能明顯

5、下調(diào)巨噬細(xì)胞SRA、 CD36，上調(diào)ABCA1、PPARγ(P＜0.05)，抑制巨噬細(xì)胞對(duì)oxLDL的凈攝入，減少泡沫化。
　　4、寧心痛顆粒含藥血清較對(duì)照組能明顯下調(diào)巨噬細(xì)胞SRA、 CD36，上調(diào)ABCA1、PPARγ(P＜0.05)，抑制巨噬細(xì)胞對(duì)oxLDL的凈攝入，減少泡沫化。
　　5、黃芪多糖、藁本內(nèi)酯、黃芪多糖合藁本內(nèi)酯、寧心痛顆粒含藥血清對(duì)巨噬細(xì)胞SRA、 CD36表達(dá)的抑制強(qiáng)度由高至低為:寧心痛顆粒含藥血清、

6、黃芪多糖合藁本內(nèi)酯、黃芪多糖、藁本內(nèi)酯，與對(duì)ABCA1、PPARγ的上調(diào)強(qiáng)度由高至低排序一致。
　　6、siRNA抑制THP-1源性巨噬細(xì)胞PPARγ的表達(dá)后，各組藥物抑制巨噬細(xì)胞泡沫化的能力均明顯下降，但寧心痛顆粒含藥血清仍有一定的抑制作用。
　　結(jié)論：
　　1、益氣活血方寧心痛顆粒益氣、活血的有效組分黃芪多糖、藁本內(nèi)酯以及含藥血清均能通過(guò)調(diào)節(jié)脂質(zhì)體的表達(dá)，抑制巨噬細(xì)胞對(duì)oxLDL的凈攝入，減少泡沫化。
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