定點(diǎn)封閉腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵位點(diǎn)防治HBV相關(guān)肝細(xì)胞癌的研究.pdf

1、目的:針對(duì)HBV相關(guān)HCC發(fā)生、發(fā)展中的關(guān)鍵因素,在肯定互補(bǔ)于c-Myc結(jié)合位點(diǎn)的人工合成的反義寡核苷酸(asON)抑制HepG2.2.15療效的前提下,以最新型的腺病毒載體AdEasy-1 system為基因轉(zhuǎn)移工具,構(gòu)建了針對(duì)于hTERT啟動(dòng)子區(qū)HBV preS2同源序列、c-Myc結(jié)合位點(diǎn)及hTERT全長(zhǎng)啟動(dòng)子的反義RNA腺病毒表達(dá)載體,經(jīng)過(guò)293細(xì)胞的包裝,成功獲得了具有感染能力的重組腺病毒顆粒,體內(nèi)外研究反義封閉hTERT啟動(dòng)

2、子活性區(qū)、HBV preS2同源序列、c-Myc結(jié)合位點(diǎn)等參與腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵部位,及癌基因c-Myc、致瘤病毒HBVpreS2基因表達(dá),對(duì)HBV相關(guān)肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制效應(yīng),為臨床反義基因治療HBV相關(guān)HCC奠定基礎(chǔ).結(jié)論:選擇在腫瘤發(fā)生中起關(guān)鍵作用的細(xì)胞端粒酶的催化亞單位(hTERT)啟動(dòng)子活性區(qū)、HBV preS2同源序列、c-Myc結(jié)合位點(diǎn)等關(guān)鍵部位為靶基因,利用反義技術(shù)定點(diǎn)封閉,不僅封閉了腫瘤發(fā)生過(guò)程中癌基因c-Myc的作用位點(diǎn)、

3、致瘤病毒HBV的整合部位,而且同時(shí)封閉了細(xì)胞端粒酶hTERT啟動(dòng)子的活性,由于HBV preS2整合位點(diǎn)與HBV preS2基因的同源性,因此也封閉了HBV preS2的活性,以此研究基因治療HBV相關(guān)肝細(xì)胞癌的生物學(xué)效應(yīng),在國(guó)內(nèi)外尚屬首次報(bào)道.體外研究證實(shí)，針對(duì)于端粒酶啟動(dòng)子活性區(qū)、HBV preS2同源序列、c-Myc結(jié)合位點(diǎn)關(guān)鍵區(qū)段的反義重組腺病毒，可以高效率感染肝癌細(xì)胞，通過(guò)對(duì)相關(guān)位點(diǎn)的有效封閉，不僅能夠?qū)Ц伟┘?xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞

4、生長(zhǎng)、降低端粒酶活性，從而抑制肝癌細(xì)胞的惡性行為，而且能夠有效抑制HBV抗原表達(dá).但多種反義RNA載體的聯(lián)合應(yīng)用難以達(dá)到預(yù)期的療效，可能不是一種有效的基因治療方案.利用最新型的腺病毒載體系統(tǒng)——AdEasy-1 system作為基因轉(zhuǎn)移的載體，既能在真核細(xì)胞內(nèi)高效表達(dá)目的基因，達(dá)到基因治療的目的，又能夠克服常規(guī)腺病毒載體同源重組困難、不易篩選的缺點(diǎn)，使基因治療操作簡(jiǎn)單、易行.由于人類端粒酶結(jié)構(gòu)具有一致性，該研究獲得的針對(duì)于腫瘤發(fā)生中起關(guān)

5、鍵作用的細(xì)胞端粒酶催化亞單位（hTERT）的啟動(dòng)子活性區(qū)、HBV preS2整合位點(diǎn)、c-Myc結(jié)合位點(diǎn)等關(guān)鍵靶基因的重組腺病毒，不僅適用于肝癌，而且適用于其他端粒酶陽(yáng)性的惡性腫瘤的基因治療研究.由于缺陷型腺病毒是目前唯一被批準(zhǔn)應(yīng)用于臨床治療的病毒型載體，能夠高效感染靶細(xì)胞，且高效表達(dá)目的基因，而病毒本身不整合，表現(xiàn)出較高的生物安全性，該研究所構(gòu)建的攜帶有端粒酶啟動(dòng)子調(diào)控區(qū)HBV preS2整合位點(diǎn)、c-Myc結(jié)合位點(diǎn)及全啟動(dòng)子活性區(qū)等