AtSARK關(guān)鍵位點的點突變及其功能研究.pdf

1、衰老作為植物生長發(fā)育的最后一個階段，同時也是一個必經(jīng)階段，是由特殊的發(fā)育信號啟動和調(diào)控的，需要一些信號傳遞途徑參與。植物LRR型類受體蛋白激酶已被證明參與調(diào)節(jié)植物的生長發(fā)育過程、植物抗逆反應以及植物激素的信號傳遞等生命活動，并能夠發(fā)揮重要作用。
　　本實驗室前期發(fā)現(xiàn)，一個擬南芥的LRR-RLK編碼基因AtSARK（Arabidopsithaliana senescence-associated receptor-like kina

2、se），是擬南芥葉片衰老調(diào)控過程中一個正調(diào)節(jié)因子，并且AtSARK所介導的信號是借助于生長素和乙烯的協(xié)同作用而發(fā)揮作用的。AtSARK具有雙底物特異性，可以在體外自磷酸化絲/蘇氨酸殘基和酪氨酸殘基。對自磷酸化的AtSARK胞內(nèi)域(AtSARKCD)進行質(zhì)譜分析，共發(fā)現(xiàn)14個磷酸化位點。
　　本文旨在通過對AtSARK自磷酸化位點進行點突變，來研究AtSARK結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。對AtSARK的自磷酸化位點進行定點突變，分別突變?yōu)楸?/p>

3、酸(A)或苯丙氨酸(F)模擬相關(guān)位點的非磷酸化狀態(tài)、突變?yōu)樘於彼?D)模擬相關(guān)位點的磷酸化狀態(tài)，以可誘導型啟動子(誘導劑為地塞米松dexamethasone，DEX)控制AtSARK表達的轉(zhuǎn)基因擬南芥為實驗材料，探討自磷酸化對SARK生物學功能的影響。發(fā)現(xiàn)AtSARK胞內(nèi)域的一個蘇氨酸殘基個和酪氨酸殘基位點對AtSARK生物學功能具有重要的影響。實驗發(fā)現(xiàn)，這兩個位點突變?yōu)楸彼岷筮^表達突變的AtSARK不能誘導轉(zhuǎn)基因植物早衰，而突變?yōu)?/p>