聚維酮碘溶液對(duì)金黃色葡萄球菌細(xì)菌生物膜的體外殺菌效果.pdf

1、目的：
　　通過(guò)在鈦板表面建立金黃色葡萄球菌細(xì)菌生物膜模型，在激光掃描共聚焦顯微鏡(CLSM)下觀察細(xì)菌生物膜(BBF)的結(jié)構(gòu)、中層及底層的活菌率；研究0.5％、0.25%濃度的聚維酮碘溶液對(duì)金黃色葡萄球菌BBF的體外殺菌效果。
　　方法：
　　選取斜面保種的金黃色葡萄球菌(SA)，接種于預(yù)先配制的胰蛋白胨大豆肉湯(TSB)中，37℃(5%CO2)的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16小時(shí)獲得菌液，通過(guò)比濁儀將菌液濃度調(diào)成1.0×10

2、6 CFU/ml備用。將15枚清潔、鈍化、消毒過(guò)的鈦板隨機(jī)分裝至3個(gè)25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶，每個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)5枚鈦板、1ml上述調(diào)配好的菌液、20mlTSB，置37℃(5％CO2)的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)形成成熟 BBF。從以上3個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶中隨機(jī)取出10枚鈦板在避光環(huán)境下由SYTO9/PI組成的染色劑染色20分鐘，在CLSM下觀察BBF的結(jié)構(gòu)、活菌率，另外5枚在經(jīng)過(guò)漩渦振蕩器、超聲降解、離心機(jī)離心處理后接種至血平板培養(yǎng)基做細(xì)菌培養(yǎng)。<

3、br>　　根據(jù)上述建模方法，在45枚鈦板表面建立金黃色葡萄球菌BBF模型，取出后用PBS沖洗3次，將45枚鈦板隨機(jī)分為3組，每組15枚，其中兩組分別置于0.5%和0.25%的聚維酮碘溶液中作用5分鐘，通過(guò)由硫代硫酸鈉、吐溫80、卵磷脂組成的中和劑將鈦板表面的碘殘留去除，這兩組中的每組其中10枚鈦板通過(guò)上述染色方法染色20分鐘后在CLSM下觀察BBF的結(jié)構(gòu)、活菌率的變化,另外5枚在經(jīng)過(guò)漩渦振蕩器、超聲清洗、離心機(jī)離心處理后接種至血平板培養(yǎng)

4、基做細(xì)菌培養(yǎng)。另外一組其中10枚鈦板作為對(duì)照組，剩余5枚在經(jīng)過(guò)漩渦振蕩器、超聲清洗、離心機(jī)離心、稀釋處理后接種至血平板培養(yǎng)基做細(xì)菌培養(yǎng)。
　　結(jié)果：
　?、貰BF在CLSM下呈高度組織化的群體結(jié)構(gòu)。BBF在CLSM下的圖像由橙色或橘黃色熒光、綠色熒光、紅色熒光、暗性區(qū)域組成。其中橙色或橘黃色熒光由活菌和死菌在同一位置疊加而成，綠色熒光代表活菌，紅色熒光代表死菌。
　?、贑LSM下的BBF是團(tuán)塊狀的多聚物。活菌大多被包裹

5、在生物膜的中間，死菌大多在BBF同一層面的外圍。
　?、叟囵B(yǎng)24小時(shí)后成熟BBF中層活菌率為(67.35±1.06)%，底層活菌率為(39.42±2.23)%。中層和底層的BBF活菌率具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　④0.5%聚維酮碘溶液作用10分鐘后的BBF的中層、底層活菌率分別為(66.65±1.37)%，(38.22±3.15)%。
　　⑤0.25%維酮碘溶液作用10分鐘后的BBF的中層、底層活菌率分

6、別為(66.53±1.00)%，(39.13±2.41)%。
　?、?.5%聚維酮碘溶液作用10分鐘后的BBF的中層、底層活菌率與0.25%聚維酮碘溶液作用10分鐘后的BBF的中層、底層活菌率和空白對(duì)照組相比差異都無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　?、吣Ｐ徒M、0.5%和.25%聚維酮碘組做細(xì)菌培養(yǎng)的血平板培養(yǎng)基內(nèi)均可見(jiàn)菌落形成，經(jīng)鑒定均為SA。
　　結(jié)論：
　　①本實(shí)驗(yàn)所采用的建立金黃色葡萄球菌BBF模型方法相對(duì)