應用DGGE技術(shù)分析白色念珠菌定植對小鼠腸道微生物區(qū)系的影響.pdf

1、腸道微生物區(qū)系在哺乳動物的健康和疾病中起著十分重要的作用，然而對這個復雜的微生物生態(tài)系統(tǒng)及其微生物多樣性至今仍然缺乏了解。其關(guān)鍵性生理功能包括保護粘膜上皮損傷，調(diào)節(jié)脂肪的儲存，刺激腸道血管生成和競爭拮抗致病菌的定植。大部分腸道致病菌在腸道內(nèi)的定植是其致病的第一步，且這種定植必須與腸道復雜的微生物區(qū)系進行相互競爭，但是致病菌定植是否會引起腸道微生物區(qū)系結(jié)構(gòu)的變化目前仍然不清楚。 由于培養(yǎng)方法在腸道微生物分離培養(yǎng)上的局限性，大量研究

2、者開始轉(zhuǎn)向運用分子指紋圖譜技術(shù)分析腸道微生物區(qū)系?；?6SrRNA基因的變性梯度凝膠電泳(denaturinggradientgelelectrophoresis，DGGE)技術(shù)具有直觀、快速和高通量的優(yōu)點，適合于分析復雜的微生物菌群。盡管該方法在對特異的細菌成員的系統(tǒng)發(fā)生鑒定上是很困難的，但是DGGE技術(shù)能夠快速提供復雜微生物區(qū)系的豐富度和均勻度信息。 本研究應用DGGE技術(shù)分析了白色念珠菌(Candidaalbicans)

3、在小鼠盲腸中定植后對腸道微生物區(qū)系結(jié)構(gòu)變化的影響。雌性SPF級BALB/c小鼠通過口服頭孢曲松水溶液5d，隨后單次口服灌胃C.albicansSC5314，這種處理導致了小鼠腸道細菌微生物區(qū)系變化，以及C.albicans在腸道內(nèi)低水平的定植至少1wk。使用16SrDNA的V3區(qū)和V6～V8區(qū)的通用引物對細菌微生物區(qū)系的DGGE分析表明，相對于正常小鼠和抗生素處理小鼠，C.albicansSC5314定植小鼠盲腸后，導致盲腸總體微生物多

4、樣性的顯著降低(P＜0.05)。這種細菌多樣性降低很大程度上是由于抑制部分微生物區(qū)系再定植而導致的。使用16SrDNA的屬或者組特異性引物(腸球菌屬、乳桿菌組和雙歧桿菌屬)的DGGE分析表明，C.albicansSC5314定植小鼠盲腸后，相對于正常小鼠和抗生素處理小鼠，腸球菌屬菌群多樣性顯著降低(P＜0.05)；相對于正常小鼠，乳桿菌組菌群多樣性顯著降低(P＜0.05)，而相對于抗生素處理小鼠未發(fā)生明顯變化(P＞0.05)；相對于抗生