環(huán)氧合酶-2及其相關(guān)因子與卵巢癌關(guān)系的實(shí)驗(yàn)與臨床研究.pdf

1、目的： 1、檢測(cè)環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)及其相關(guān)因子血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C(vascularendothelialgrowthfactor-C，VEGF-C)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-A(vascularendothelialgrowthfactor-A，VEGF-A)在卵巢腫瘤組織中的表達(dá)。 2、探討COX-2、VEGF-C、VEGF-A與上皮性卵巢癌(epithelialovarianca

2、rcinoma，EOC)患者臨床、病理特征的關(guān)系。 3、通過(guò)分析COX-2、VEGF-C、VEGF-A之間的相關(guān)性及對(duì)微淋巴管密度(microlymphaticdensity，MLD)、微血管密度(microvasculardensity，MVD)的影響。初步探討COX-2在卵巢癌侵襲、轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制。 4、檢測(cè)COX-2在卵巢癌細(xì)胞系中的表達(dá)，觀察選擇性COX-2抑制劑塞來(lái)昔布(celecoxib)對(duì)卵巢癌細(xì)胞系生長(zhǎng)

3、抑制作用和細(xì)胞凋亡(apoptosis)的影響。為選擇性COX-2抑制劑應(yīng)用于卵巢癌化療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1、采用免疫組化方法(immunohistochemicalstainingmethod，IHC)分別檢測(cè)EOC患者45例、良性卵巢腫瘤10例、正常卵巢組織12例中的COX-2、VEGF-C、VEGF-A、VEGFR-3(vascularendothelialgrowthfactorrecepter-3)、CD

4、34的表達(dá)情況。分析COX-2、VEGF-C、VEGF-A卵巢癌患者臨床、病理特征的關(guān)系及對(duì)MLD、MVD的影響。 2、采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法(immuno-cell-chemicalstainingmethod)檢測(cè)COX-2在卵巢癌細(xì)胞系SKOV3、OVCAR3中的表達(dá)。采用MTT(MTTreductionassay)、吖啶橙(acridineorange，AO)/溴化乙錠(ethidiumbromide,EB)雙熒光染色結(jié)合

5、熒光顯微鏡技術(shù)觀察選擇性COX-2抑制劑塞來(lái)昔布對(duì)卵巢癌細(xì)胞系生長(zhǎng)抑制作用和細(xì)胞凋亡的影響。 結(jié)果： 1、COX-2蛋白在45例上皮性卵巢癌組織中有32例呈陽(yáng)性，其中低表達(dá)者13例，高表達(dá)者19例，陽(yáng)性率為71.1％(32/45)，而在正常卵巢和良性卵巢腫瘤組織中未見(jiàn)表達(dá)。EOC組織中VEGF-C蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為51.1％(23/45)，其中低表達(dá)者11例，高表達(dá)者12例，明顯高于在正常卵巢和良性卵巢腫瘤組織中的表達(dá)(χ

6、2=4.37，P＜0.05；χ2=4.08,P＜0.05)，正常卵巢組織有1例、良性卵巢腫瘤組織中有1例呈弱染色。VEGF-A的陽(yáng)性表達(dá)率為55.6％(25/45)，其中低表達(dá)者9例，高表達(dá)者16例，明顯高于在正常卵巢和良性卵巢腫瘤組織中的表達(dá)(χ2=4.29,P＜0.05；χ2=4.81，P＜0.05)，正常卵巢組織有2例(16.7％)、良性卵巢腫瘤組織有2例(20％)呈陽(yáng)性。 2、COX-2、VEGF-C、VEGF-A表達(dá)與

7、年齡、臨床期別(clinicstages)、組織類型(histology-type)及不同的分化程度(grades)、有無(wú)腹水(pascities)等臨床特征無(wú)明顯相關(guān)性(P均＞0.05)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的卵巢癌組織中COX-2、VEGF-C、VEGF-A的陽(yáng)性表達(dá)率(分別為83.3％，66.7％，66.7％)均明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(分別為46.7％，20％，33.3％)，差異有顯著意義(P均＜0.05)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的卵巢癌組織中

8、MLD為18.5±7.8，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者M(jìn)LD為12.3±5.7，兩者比較差異有顯著性(P＜0.05，t=2.73)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的卵巢癌組織中MVD為46.1±20.5，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者M(jìn)VD為32.4±17.6，兩者比較差異有顯著性(t=2.21，P＜0.05) 3、EOC組織中COX-2和VEGF-C表達(dá)有顯著等級(jí)相關(guān)性(rs=0.415，P＜0.01)。COX-2和VEGF-A表達(dá)有顯著等級(jí)相關(guān)性(rs=0.624，P＜

9、0.01)，COX-2表達(dá)陽(yáng)性的32例中平均MLD為18.7±7.3，表達(dá)陰性的13例腫瘤組織中平均MLD為9.5±7.1，兩者比較有顯著差異(t=3.86,P＜0.01)。COX-2表達(dá)陽(yáng)性的平均MVD為42.5±15.4，陰性的者平均MVD為28.4±17.5，兩者比較有顯著差異(t=2.68,P＜0.01)。 4、OVCAR3和SKOV3兩種細(xì)胞株中均有COX-2表達(dá)，但OVCAR-3為強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，SKOV3為陽(yáng)性表達(dá)。經(jīng)

10、塞來(lái)昔布作用24小時(shí)后OVCAR3、SKOV3細(xì)胞中的棕黃色顆粒明顯變淺，表明COX-2的表達(dá)降低。MTT結(jié)果顯示：塞來(lái)昔布對(duì)OVCAR3、SKOV3細(xì)胞株的生長(zhǎng)抑制作用呈時(shí)間和濃度依賴。AO/EB雙熒光染色法觀察到塞來(lái)昔布12.5μM作用OVCAR3細(xì)胞24h后，即可發(fā)現(xiàn)典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變，隨塞來(lái)昔布濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞凋亡愈明顯，呈濃度和時(shí)間依賴，經(jīng)S-N-K分析，組間兩兩比較均P＜0.05，差異顯著。 結(jié)論：

11、 1、EOC組織和細(xì)胞株中均存在COX-2的高表達(dá)，而在正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤組織中未見(jiàn)表達(dá)。 2、COX-2可促進(jìn)EOC組織的新生血管形成，COX-2和VEGF-A之間存在相互調(diào)節(jié)關(guān)系，COX-2可能通過(guò)VEGF-A促進(jìn)腫瘤血管生成。COX-2誘導(dǎo)腫瘤血管形成在腫瘤的轉(zhuǎn)移過(guò)程中可能發(fā)揮一定作用。 3、COX-2可促進(jìn)EOC組織的新生淋巴管形成，COX-2和VEGF-C之間存在相互調(diào)節(jié)關(guān)系，VEGF-C可能是