小鼠胰腺癌演進(jìn)中髓系來(lái)源抑制細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化及體外誘導(dǎo)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞分化的研究.pdf

1、背景與目的：
　　胰腺癌免疫治療為近年來(lái)研究熱點(diǎn)，進(jìn)行體內(nèi)免疫治療研究最重要一步為建立免疫健全小鼠的胰腺癌動(dòng)物模型，從而更好的模擬人胰腺癌的腫瘤微環(huán)境。髓系來(lái)源抑制細(xì)胞(myeloid derived suppressor cells，MDSC)與腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（tumor associated macrophages，TAM）為重要的兩群腫瘤免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，可抑制多種免疫效應(yīng)細(xì)胞的功能，與腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展密切相關(guān)。本研究嘗試?yán)?/p>

2、小鼠胰腺癌細(xì)胞系Panc02細(xì)胞建立小鼠胰腺癌皮下移植瘤模型，并進(jìn)一步觀察荷瘤鼠胰腺癌在發(fā)生發(fā)展過(guò)程中MDSC的動(dòng)態(tài)變化。同時(shí)嘗試?yán)肞anc02培養(yǎng)上清液體外誘導(dǎo)小鼠單核巨噬細(xì)胞系RAW264.7向TAM分化。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)Panc02細(xì)胞，將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的1×106個(gè)/100μl腫瘤細(xì)胞接種于C57BL/6J小鼠左前腋窩皮下，觀察腫瘤生長(zhǎng)變化情況，擇時(shí)取材切片做H&E染色。根據(jù)瘤體大小，將腫瘤定義為T(mén)x期（

3、可疑瘤體形成）、T1期（0＜瘤體體積≦500mm3）、T2期（500mm3＜瘤體體積≦1750mm3）、T3期（1750mm3＜瘤體體積≦4000mm3）、T4期（4000mm3＜瘤體體積）。分別取荷瘤鼠與正常鼠外周血、脾臟行流式染色。然后分析外周血和脾臟中CD11b+Gr-1+MDSC及其亞群（CD11b+Ly6C+MDSC、CD11b+Ly6G+MDSC）動(dòng)態(tài)變化。用小鼠胰腺癌Panc02細(xì)胞系的培養(yǎng)上清刺激單核巨噬細(xì)胞系RAW26

4、4.7，誘導(dǎo)72小時(shí)后收集細(xì)胞，流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測(cè)RAW264.7向TAM分化情況。
　　結(jié)果：
　　小鼠平均成瘤時(shí)間約為12天，成瘤率100％，接種后3-4周進(jìn)入快速生長(zhǎng)期。腫瘤質(zhì)地較硬，晚期表面可有破潰出血。皮下瘤組織病理切片H&E染色后可見(jiàn)組織細(xì)胞排列混亂、極性消失，細(xì)胞核分裂相多見(jiàn)、異型性明顯，并可見(jiàn)不典型腺腔結(jié)構(gòu)及播散分布的癌巢，符合惡性導(dǎo)管上皮樣癌表現(xiàn)。正常對(duì)照小鼠外周血CD11b+Gr-1+細(xì)胞群為7.3％，T

5、x、 T1、T2、T3、T4外周血CD11b+Gr-1+細(xì)胞群分別為3.7％、4.9％、11.6％、16.7％、25％;正常對(duì)照小鼠外周血中CD11b+Ly6C+、CD11b+Ly6G+細(xì)胞群分別為6.2％和4.8％，Tx、T1、T2、T3、T4外周血中CD11b+Ly6C+細(xì)胞群分別為4.9％、12.6％、8.5％、18％、24.7％，CD11b+Ly6G+細(xì)胞群分別為3.8％、9.5％、6.6％、19.9％、24.9％。正常對(duì)照小鼠

6、脾標(biāo)本中CD11b+Gr-1+細(xì)胞群為3.4％，CD11b+Ly6C+、CD11b+Ly6G+細(xì)胞群分別為3.9％和3.6％; T4荷瘤小鼠脾標(biāo)本中CD11b+Gr-1+細(xì)胞群為20.4％，CD11b+Ly6C+、CD11b+Ly6G+細(xì)胞群分別為15.5％和13.9％。腫瘤上清液刺激RAW264.7后M1型（F4/80+CD16/32+）及M2型(F4/80+CD206+)TAM較對(duì)照組均明顯升高(44.2％vs28.5％，18.5％