兒童孤獨癥線粒體DNA拷貝數變異研究.pdf

1、兒童孤獨癥是一種病因及發(fā)病機制仍不明確的發(fā)育障礙。多在嬰幼兒時期起病，3歲左右癥狀變得典型，并能得以確診。兒童孤獨癥是廣泛性發(fā)育障礙中一種亞型，以社會互動障礙、溝通障礙、刻板行為及狹窄的興趣為主要特征。線粒體是真核細胞中重要的細胞器，是細胞能量的生成場所，提供90％的ATP能源。線粒體中含有DNA，稱為線粒體DNA(mitochondrial DNA, mtDNA)。線粒體DNA直接暴露在高氧環(huán)境中，自身缺乏蛋白的保護以及損傷修復系統(tǒng)，

2、故線粒體DNA更容易受到氧化損傷，并且難以恢復，從而更易出現(xiàn)變異。研究發(fā)現(xiàn)線粒體功能的異常與孤獨癥存在相關性。線粒體功能的異常會影響腦部供能，從而影響大腦的發(fā)育。而多項研究表明孤獨癥患者的大腦發(fā)育存在異常。本研究以兒童孤獨癥為研究對象，通過檢測外周血中線粒體DNA的拷貝數變化，進而探索這種異常與兒童孤獨癥發(fā)病機制的可能聯(lián)系。
　　 目的:
　　 研究兒童孤獨癥外周血液中線粒體DNA拷貝數的變異，探索線粒體DNA的功能障礙

3、與兒童孤獨癥發(fā)病機制的可能聯(lián)系。
　　 方法:
　　 1、共入組101例兒童孤獨癥患兒和118例健康體檢兒童。調查一般人口學資料、母孕期情況、養(yǎng)育情況、既往史、家族史及體格檢查。孤獨癥患兒同時調查癥狀的表現(xiàn)及評定兒童孤獨癥評定量表（the childhood autismrating scale, CARS）。
　　 2、抽取肘靜脈血2-4ml直接注入含有EDTA-K2的抗凝管中，顛倒混勻并冰凍保存。用DNA試劑

4、盒提取血液DNA，4℃保存。通過搜索資料，設計線粒體引物，進行實時熒光定量聚合酶鏈反應。
　　 3、用spss13.0統(tǒng)計分析軟件對孤獨癥組和對照組的數據進行分析，用GraphPad Prism5繪圖軟件繪圖分析。
　　 結果:
　　 1、納入孤獨癥組患者共101例，其中男性90例，女性11例。納入正常對照組共118例，其中男性92例，女性26例;
　　 2、孤獨癥組血液中線粒體DNA拷貝數顯著多于正常對

5、照組(p=0.039);
　　 3、男性孤獨癥組血液中線粒體DNA拷貝數顯著多于男性正常對照組(p=0.031);女性孤獨癥組血液線粒體DNA拷貝數與正常對照組無顯著差異(p=1);
　　 4、在＜6歲年齡組中，男性孤獨癥組血液中線粒體DNA拷貝數顯著多于正常對照組(p=0.001);而6-13歲年齡組中，男性孤獨癥組與正常對照組之間無差異(p=0.830);
　　 5、＜6歲男性孤獨癥組血液中線粒體DNA拷貝數

6、與6-13歲男性孤獨癥組差異不顯著(p=0.0723);＜6歲男性正常對照組血液中線粒體DNA拷貝數顯著低于6-13歲男性正常對照組(p=0.001);
　　 6、隨著年齡的增長，孤獨癥組血液中線粒體DNA拷貝數增加，但增加趨勢不顯著(r=0.142，p＞0.05)。
　　 結論:
　　 1、孤獨癥患者血液白細胞中線粒體DNA拷貝數異常增多，主要為男性患者，而非女性患者。
　　 2、隨著年齡的增長，孤獨癥