匍匐翦股穎、溝葉結(jié)縷草離體培養(yǎng)與遺傳轉(zhuǎn)化初步研究.pdf

1、匍匐翦股穎是多年生匍匐莖型草本植物，可形成細(xì)致、平整均一，致密如綠色地毯的草坪坪面，是高爾夫球場(chǎng)的首選草種。溝葉結(jié)縷草，又稱(chēng)馬尼拉草，是我國(guó)南方大部分地區(qū)草坪的主要栽培種。篩選與培育優(yōu)良的草坪草品種是草坪業(yè)的重要任務(wù)。本論文主要分成以下三部分：第一部分以匍匐翦股穎L-93的種子為外植體，系統(tǒng)比較了不同蔗糖濃度、不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的組合和濃度、暗培養(yǎng)，以及不同添加物對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響。第二部分以匍匐翦股穎細(xì)葉突變體的匍匐莖為外植體，系統(tǒng)比較

2、了不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的組合和濃度，不同蔗糖濃度，不同固化物以及外植體不同位置的莖節(jié)對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響。第三部分以匍匐翦股穎、溝葉結(jié)縷草的愈傷組織，匍匐翦股穎細(xì)葉突變體、溝葉結(jié)縷草的匍匐莖為材料，初步進(jìn)行了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化。主要研究結(jié)果如下： 1.在試驗(yàn)1中，隨著蔗糖濃度的升高，愈傷組織的誘導(dǎo)率是先升高，后降低。以蔗糖濃度為40g／L時(shí)，愈傷組織的誘導(dǎo)率最高。在9種不同的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配比中，2 mg/L 2，4-D和0.1 mg/

3、l 6-BA的配比對(duì)匍匐翦股穎種子誘導(dǎo)愈傷組織的效果是最佳。試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)暗培養(yǎng)、在培養(yǎng)基中添加椰乳和脯氨酸對(duì)愈傷組織的增殖有明顯的促進(jìn)作用。 2.在試驗(yàn)2中，發(fā)現(xiàn)2 mg/L 2，4-D和0.1 mg/L 6-BA的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合中匍匐莖愈傷組織誘導(dǎo)率最高。生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素的濃度之比也影響著愈傷組織的誘導(dǎo)，以2 mg／L 2，4-D和0.1 mg／L 6-BA組合的培養(yǎng)基愈傷組織誘導(dǎo)率最高。在試驗(yàn)設(shè)計(jì)的6種蔗糖濃度中，40g/L

4、是匍匐莖誘導(dǎo)愈傷組織最有效的蔗糖濃度。在4種固化物的比較中，愈傷組織誘導(dǎo)率最高的是Phytagel。在莖節(jié)的不同位置中，離頂端最近的莖節(jié)愈傷組織誘導(dǎo)率最高。 3.在試驗(yàn)3中，通過(guò)對(duì)匍匐翦股穎和溝葉結(jié)縷草的愈傷組織的篩選，當(dāng)草甘膦濃度為1.0mM時(shí)，匍匐翦股穎和溝葉結(jié)縷草的再生率分別為15.5％和4.5％；當(dāng)草甘膦濃度為2.0mM時(shí)，匍匐翦股穎和溝葉結(jié)縷草的再生率分別為8.75％和1.78％。通過(guò)對(duì)匍匐翦股穎和溝葉結(jié)縷草的匍匐莖的