菊花DgZFP5及bZIP1基因的克隆和功能鑒定.pdf

1、菊花作為世界四大鮮切花之一，除具有世人早已熟知的觀賞價值、藥用價值和食用價值外，菊花還具有相當高的經濟價值，在世界各地廣泛栽培。然而，在菊花的實際生產中，常常受到如干旱、高鹽等不利環(huán)境因子的影響，時下菊花育種的迫切目的之一就是培育耐逆性強的菊花新品種。
　　無論是在植物生長發(fā)育還是在脅迫響應過程中，C2H2型鋅指蛋白和bZIP類轉錄因子都發(fā)揮著極其重要的作用。本實驗以菊花為實驗材料，基于新一代高通量測序技術Illumina HiS

2、eq2000對菊花轉錄組進行測序獲得數(shù)據(jù)庫，從中篩選出具有完整開放閱讀框的基因，利用電子克隆和RT-PCR技術克隆得到新的C2H2型鋅指蛋白和bZIP類轉錄因子，分別命名為DgZFP5和bZIP1。序列分析顯示:DgZFP5的開放閱讀框為450bp，編碼149個氨基酸殘基，基因編碼蛋白質分子量為16.7KDa，等電點為9.11，并且該基因編碼的蛋白含有2個C2H2鋅指域和一個EAR-box(DLNL);bZIP1的開放閱讀框為417bp

3、，編碼138個氨基酸殘基，基因編碼蛋白質分子量為16.3KDa，等電點為9.50。
　　使用DgZFP5基因質粒與植物表達載體pBI121構建表達載體pBI121-DgZFP5，同時由bZIP1基因質粒和植物表達載體pCAMBIA2300構建表達載體pCAMBIA2300-bZIP1，通過農桿菌介導法轉化煙草，分別成功獲得DgZFP5和bZIP1轉基因煙草植株。表型觀察發(fā)現(xiàn):在正常情況下，野生型和5個轉DgZFP5基因株系在整個生