擬南芥莖尖干細(xì)胞決定基因WUSCHEL的泛素化研究及WUS相互作用蛋白的篩選.pdf

1、高等植物莖端分生組織的調(diào)控是一個(gè)復(fù)雜而精細(xì)的過(guò)程，WUS是莖尖干細(xì)胞決定基因，與莖端分生組織干細(xì)胞的發(fā)生和維持都密切相關(guān)。本論文就前人還沒(méi)有研究過(guò)的WUS蛋白的泛素化過(guò)程及其相互作用蛋白展開(kāi)研究。
　　首先本實(shí)驗(yàn)建立了離體的蛋白分析系統(tǒng)，將純化的WUS蛋白加入擬南芥幼苗的無(wú)細(xì)胞提取液中反應(yīng)，然后檢測(cè)其水平的變化，結(jié)果證明WUS蛋白在無(wú)細(xì)胞提取液中被逐漸降解，并且這種降解不能被廣譜型蛋白酶抑制劑PMSF抑制，卻可以被適當(dāng)濃度的蛋白酶

2、體抑制劑MG132、ALLN抑制。用蛋白酶體抑制劑來(lái)處理超表達(dá)WUS的轉(zhuǎn)基因幼苗，發(fā)現(xiàn)經(jīng)處理后其體內(nèi)原本水平很低的WUS蛋白顯著升高，得到與離體實(shí)驗(yàn)一致的結(jié)果，表明超表達(dá)WUS的轉(zhuǎn)基因植株中的WUS蛋白通過(guò)泛素蛋白酶體途徑被降解了。為了找到介導(dǎo)WUS蛋白泛素化的E3連接酶，本實(shí)驗(yàn)又建立了WUS蛋白的酵母雙雜交系統(tǒng)，以WUS蛋白作為誘餌蛋白，在擬南芥cDNA文庫(kù)中找到了多個(gè)與其可能存在相互作用的蛋白質(zhì)，這些蛋白的發(fā)現(xiàn)為進(jìn)一步研究WUS蛋白