免疫組化方法示蹤PRV感染肛門括約肌的神經傳導研究.pdf

1、偽狂犬病病毒是畜牧生產上一個重要的病毒，嚴重危害著養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展，同時作為神經示蹤研究中的一種新興的模式病毒，也被科學家們廣泛關注和研究。
　　本研究測定了實驗室構建的偽狂犬病毒株SA215-T的病毒滴度，并用該毒株感染SD大鼠，建立了SA215-T人工感染大鼠的病理模型。感染56小時后，大鼠出現(xiàn)發(fā)熱，奇癢和共濟失調等癥狀，115小時左右開始死亡，解剖病變主要為肺輕度水腫，腦組織彌漫性出血。PRV SA215-T感染大鼠后平均存

2、活時間120小時，比PRV Bartha-K61株感染大鼠的平均存活時間114小時稍長，PRV SA215-T適合用于建立PRV人工感染大鼠的病理模型。
　　本研究分別用PRV SA215-T與Bartha-K61人工感染大鼠，觀察記錄了大鼠感染偽狂犬病毒后的臨床癥狀及存活情況，在不同時間解剖大鼠并采集心肝脾肺腎腦等組織器官，通過PCR檢測PRV抗原在大鼠體內各組織器官的分布規(guī)律。結果表明，大鼠感染PRV之后的48小時內，各組織器

3、官內未檢測到PRV抗原;感染56小時左右，肺臟PRV抗原呈陽性分布;隨著時間的推移，組織器官中PRV抗原分布越來越廣，最終幾乎遍布于所有組織器官。本研究建立了間接免疫組化檢測PRV抗原的方法并優(yōu)化了免疫組化條件。用建立的免疫組化方法可以便捷地檢測到大鼠組織器官中的PRV抗原。該方法快速簡單，敏感性高，特異性強，染色結果便于觀察，能用于臨床檢測。
　　本研究用建立的間接免疫組化方法檢測并定位了人工感染大鼠后PRVSA215-T在脊髓

4、中的位置，示蹤了PRV感染大鼠肛門括約肌的神經傳導通路:感染后48小時在腰髓4-5節(jié)段初次檢測到PRV;感染56小時左右，胸髓11-12節(jié)段檢測到PRV;感染66小時左右在頸髓6-7節(jié)段檢測到PRV;感染72小時在大腦檢測到PRV。基因缺失后的偽狂犬病毒具有逆神經傳導特性，用免疫組化方法可以特異性地追蹤其在神經傳導中的路徑。本研究通過建立的大鼠病理模型，探明了PRV感染大鼠肛門括約肌的神經傳導通路，為進一步研究先天性肛門閉鎖癥的發(fā)病機制