枇杷葉三萜酸對慢性支氣管炎防治作用的部分機(jī)制研究.pdf

1、慢性支氣管炎(chronic bronchitis，CB)是一種常見的慢性非特異性呼吸系統(tǒng)疾病，主要臨床特征為反復(fù)發(fā)作的咳嗽、咳痰或伴喘息。其發(fā)病率高，病情反復(fù)，可并發(fā)阻塞性肺氣腫，甚至肺動脈高壓、肺原性心臟病等。目前認(rèn)為，大氣污染、吸煙、病原體感染及過敏因素等與慢性支氣管炎的發(fā)病密切相關(guān)，但發(fā)病后的機(jī)體免疫功能狀態(tài)則影響了慢性支氣管炎的發(fā)生和發(fā)展。因此，糾正或調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能紊亂可能是防治慢性支氣管炎的重要手段之一。 慢支的治

2、療，目前應(yīng)用較多著眼于抗炎、鎮(zhèn)咳、平喘作用的研究，但尚無療效很滿意的藥物，而通過使用改善機(jī)體免疫功能狀態(tài)的免疫調(diào)節(jié)藥物，尤其是具有免疫調(diào)節(jié)作用的中藥來減少細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)等促炎因素的產(chǎn)生，從而抑制慢支炎癥進(jìn)展，可能是慢支治療的新思路。枇杷葉是薔薇科枇杷屬枇杷Eriobotryajaponica(Thunb)Lindl的葉，一直是我國傳統(tǒng)醫(yī)藥治療呼吸道炎癥性疾病的常見中藥之一，本課題組前期在國家自然科學(xué)基金資助下(NO:30371766

3、)證實(shí)枇杷葉的有效活性部位為三萜酸。枇杷葉三萜酸(triterpene Acids of Loquat Leaf,TAL)有高效、低毒的作用特征，并具有明顯的抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用，對慢支具有較理想的防治作用。肺泡巨噬細(xì)胞(alveolar macrophages，AM)是肺部炎癥反應(yīng)細(xì)胞因子、生長因子、炎癥介質(zhì)、氧自由基的重要來源，是肺內(nèi)重要的防御、保護(hù)和調(diào)節(jié)細(xì)胞。AM的激活是肺部炎癥反應(yīng)的重要始動因素。前期研究表明TAL灌胃給藥可明顯降

4、低慢支大鼠肺組織勻漿中TNF-a、IL-8、IL-1水平，5升高IL-10的表達(dá)，并對慢支大鼠氣道粘膜上皮細(xì)胞NF-kB、ICAM-1的蛋白表達(dá)具有一定的抑制作用。此外TAL能明顯抑制慢支大鼠AM自由基的產(chǎn)生，抑制炎癥介質(zhì)PGE2及LTB4的合成及釋放。一氧化氮(NO)是一多功能分子，在呼吸系統(tǒng)的生理和病理過程中起重要作用，因此研究TAL對其是否具有藥理作用也顯得尤為關(guān)鍵。引外對于AM等細(xì)胞激活的分子機(jī)制的目前尚不明確。鑒于MAPK信號

5、傳導(dǎo)通路在炎癥反應(yīng)中的重要作用，本課題旨在前期研究的基礎(chǔ)上，以AM為平臺，MAPK信號通路為研究對象，研究慢支大鼠AM MAPK信號傳導(dǎo)通路并探討TAL對其信號傳導(dǎo)通路的影響，從而進(jìn)一步闡明TAL對慢性支氣管炎防治作用的細(xì)胞分子機(jī)制，為將其開發(fā)為治療慢支的新藥提供試驗(yàn)依據(jù)。課題為國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(NO：30572355)。主要研究內(nèi)容包括以下三個方面： 1.枇杷葉三萜酸對慢性支氣管炎大鼠肺泡巨噬細(xì)胞一氧化氮合酶及一氧化

6、氮表達(dá)的影響復(fù)制大鼠慢支模型，通過TAL灌胃給藥治療，觀察TAL對CB大鼠AM iNOS表達(dá)、活性及NO釋放的影響。結(jié)果顯示：TAL抑制CB大鼠AM iNOS的表達(dá)及其活性，從而減少NO的釋放，這可能是其對慢支的治療與防治作用機(jī)制之一。 2.慢支大鼠肺泡巨噬細(xì)胞內(nèi)MAPK信號傳導(dǎo)通路及其他通路的關(guān)系分別應(yīng)用MAPK通路上游信號蛋白(PTK,PI3K, Akt，PKC)的特異性阻滯劑預(yù)處理AM，觀察下游蛋白磷酸化水平，以確定轉(zhuǎn)錄前

7、調(diào)節(jié)相關(guān)信號蛋白。結(jié)果顯示：Genistein可以不同程度的抑制PKC、PI3K/Akt、MAPK通路磷酸化的程度；LY294002可以抑制PI3K/Akt磷酸化的水平，同時(shí)誘導(dǎo)p-p38、p-JNK的高表達(dá)，對PKC/ERK這條經(jīng)典途徑的磷酸化也有一定的激活作用；Calphostin C阻斷PKC的磷酸化，對p-ERK水平有較大影響，而對p-p38和p-JNK則影響不大。推出大鼠慢支模型大鼠AM中LPS信號轉(zhuǎn)導(dǎo)MAPK通路可能為PTK

8、-PI3K/Akt-JNK/p38或者PTK-PI3K-PKC-ERK。 3.枇杷葉三萜酸(TAL)治療慢性支氣管炎的作用位點(diǎn)研究基于第二部分的研究，進(jìn)一步探討TAL對MAPK通路的轉(zhuǎn)錄前信號蛋白的作用環(huán)節(jié)。發(fā)現(xiàn)TAL對p-p38，p-JNK，p-ERK,p-PKC及p-Akt皆有一定抑制作用(其中對p38和JNK磷酸化水平有顯著的抑制效應(yīng))，而對p-PI3K，其作用不甚明顯：同時(shí)，TAL對模型組TLR4受體水平的增高也無明顯