肺炎克雷伯菌氨基糖苷類修飾酶和16S rRNA甲基化酶耐藥基因研究.pdf

1、目的：調(diào)查中南大學(xué)湘雅醫(yī)院臨床分離的肺炎克雷伯菌藥物敏感性,檢測(cè)氨基糖苷類修飾酶和16S rRNA甲基化酶基因,探討肺炎克雷伯菌對(duì)氨基糖苷類抗菌藥物的耐藥機(jī)制,為臨床抗菌藥物選用提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
　　 方法：⑴收集中南大學(xué)湘雅醫(yī)院2009年1月至2009年7月間非重復(fù)肺炎克雷伯菌96株,所有菌株采用法國(guó)梅里埃公司的全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)VITEK-2的革蘭陰性菌GN卡鑒定和AST GN-13卡進(jìn)行藥敏分析。采用瓊脂稀釋法對(duì)慶大霉素

2、,阿米卡星,妥布霉素進(jìn)行MIC檢測(cè)。⑵采用PCR法對(duì)氨基糖苷類修飾酶基因aac(3)-Ⅰ、aac(6’)-Ⅰb、ant(3”)-Ⅰ、aph(3’)-Ⅵ a和16s rRNA甲基化酶基因armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、npmA進(jìn)行檢測(cè)。⑶將擴(kuò)增的DNA產(chǎn)物純化后進(jìn)行測(cè)序分析,將測(cè)序結(jié)果通過(guò)BLAST與基因庫(kù)已知序列進(jìn)行對(duì)比分析,確定其基因型。⑷將96株肺炎克雷伯菌耐藥基因型與耐藥表型進(jìn)行比較分析,探討耐藥基因與耐藥表型的

3、關(guān)系。
　　 結(jié)果：①96株肺炎克雷伯菌對(duì)慶大霉素的耐藥率達(dá)到63.5％,對(duì)妥布霉素的耐藥率是41.7％,對(duì)阿米卡星耐藥率最低,僅為21.9％,對(duì)阿米卡星耐藥的菌株均對(duì)慶大霉素和妥布霉素耐藥。三種氨基糖苷類藥物的MIC50和MIC90分別≥256μg/ml和＞512μg/ml。②經(jīng)過(guò)氨基糖苷類修飾酶基因PCR擴(kuò)增及測(cè)序分析,96株肺炎克雷伯菌中有18.8％的菌株攜帶aac(3)-Ⅰ基因(18/96)、57.3％的菌株攜帶aac(

4、6’)-Ⅰb基因(55/96)、3.1％的菌株攜帶ant(3”)-Ⅰ基因(3/96)。③aac(6’)-Ⅰb是氨基糖苷類修飾酶基因中最常見(jiàn)的基因型,在環(huán)丙沙星敏感菌和耐藥菌中aac(6’)-Ⅰb攜帶率分別為50％(36/72)和79.1％(19/24),經(jīng)x2檢驗(yàn)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=6.26,P＜0.05)。④經(jīng)16s rRNA甲基化酶基因PCR擴(kuò)增和測(cè)序分析,有22株攜帶armA基因,占22.9％(22/96),其中77.3％(

5、17/22)產(chǎn)armA型甲基化酶基因的菌株對(duì)慶大霉素、妥布霉素和阿米卡星同時(shí)耐藥且都為高度耐藥(MICs≥512μg/ml),未檢測(cè)出aph(3’)-Ⅵ a及rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、npmA型甲基化酶基因。
　　 結(jié)論：⑴首次在湖南地區(qū)發(fā)現(xiàn)aac(3)-Ⅰ、aac(6’)-Ⅰb、antq(3”)-Ⅰ型氨基糖苷類修飾酶基因及armA型16s rRNA甲基化酶耐藥基因,氨基糖苷類修飾酶基因以aac(6’)-Ⅰb為主,