銅 綠假單胞菌氨基糖苷類耐藥16S rRNA甲基化酶編碼基因分布研究.pdf

1、銅綠假單胞菌(Peaudomonas aeruginosa)是一類不發(fā)酵糖的革蘭陰性桿菌，廣泛分布于水、土壤、醫(yī)院環(huán)境和人體的皮膚表面，已成為醫(yī)院獲得性感染的主要致病菌之一，主要引起醫(yī)院獲得性肺炎尤其是呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎、菌血癥、尿路感染、繼發(fā)性腦膜炎等。隨著廣譜抗菌藥物的廣泛使用，多重耐藥銅綠假單胞菌日趨增多，成為臨床抗感染治療的巨大挑戰(zhàn)，也對(duì)院內(nèi)感染的控制提出了新的要求。氨基糖苷類抗生素是臨床上治療革蘭陰性菌所致嚴(yán)重感染的常用藥，常與

2、β-內(nèi)酰胺類等抑制細(xì)菌細(xì)胞壁合成的抗菌藥物聯(lián)合應(yīng)用。近年來我國(guó)銅綠假單胞菌分離率明顯增加，耐藥率也不斷上升。且已出現(xiàn)對(duì)β-內(nèi)酰胺類、碳青霉烯類、氨基糖苷類、氟喹諾酮類抗菌藥物同時(shí)耐藥的多重耐藥菌株的流行。對(duì)銅綠假單胞菌中出現(xiàn)的氨基糖苷類耐藥新機(jī)制-16S rRNA甲基化酶進(jìn)行研究，有利于進(jìn)一步了解銅綠假單胞菌耐藥的流行趨勢(shì)和分子機(jī)理，指導(dǎo)臨床用藥。 本實(shí)驗(yàn)收集2006年6月至2007年8月，全國(guó)15個(gè)省市臨床分離的銅綠假單胞菌6

3、56株，瓊脂稀釋法測(cè)定異帕米星，阿米卡星，妥布霉素，奈替米星，慶大霉素5種氨基糖苷類抗生素對(duì)銅綠假單胞菌及銅綠假單胞菌的最低抑菌濃度(MIC)。PCR篩選六種16S rRNA甲基化酶基因armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA。對(duì)armA陽性菌株進(jìn)一步PCR檢測(cè)其周圍結(jié)構(gòu)，克隆測(cè)序明確基因型；脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)分析菌株的同源性；接合試驗(yàn)、質(zhì)粒抽提，以及Southern雜交確定armA及rmtB基因定位。結(jié)果顯示

4、：656株銅綠假單胞菌對(duì)異帕米星，阿米卡星，妥布霉素，奈替米星，慶大霉素耐藥率分別為31.8％、30.1％、45.5％、46.8％、56.5％；對(duì)5種氨基糖苷類抗生素全部耐藥菌株179株，其中12株armA基因陽性，45株rmtB基因陽性。未發(fā)現(xiàn)rmtA、rmtC、rmtD和npmA基因。armA基因陽性菌株其周圍序列與攜帶armA基因的Tn1548的周圍結(jié)構(gòu)部分相同。armA基因陽性菌株P(guān)FGE分型以A、B、C 3型為主，rmtB基因

5、陽性菌株P(guān)FGE分型分析提示為十個(gè)克隆。堿裂解法抽提得到armA克隆A，B質(zhì)粒，armA基因克隆C及rmtB基因陽性菌株質(zhì)粒反復(fù)抽提失敗，多次接合試驗(yàn)未成功；Southern雜交顯示armA基因克隆A，B，C分別位于菌株染色體SpeI-酶切片段48.5kb大小的片段上，rmtB基因位于菌株染色體SpeI-酶切片段約80kb-400kb的不同大小片段上。 以上研究表明，16S rRNA甲基化酶基因armA及rmtB基因在我國(guó)銅綠假