苯扎溴銨抗膀胱腫瘤作用的體外實(shí)驗(yàn)研究及其對線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡通路的影響.pdf

1、目的:盡管非肌層浸潤性膀胱尿路上皮癌在手術(shù)治療后采取各種各樣的藥物進(jìn)行膀胱灌注治療，其術(shù)后復(fù)發(fā)率仍居高不下。尋求新的更有效的灌注藥物是泌尿外科醫(yī)生的關(guān)注焦點(diǎn)之一。苯扎溴銨作為臨床最廣泛使用的皮膚、粘膜消毒劑，有文獻(xiàn)報(bào)道其有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用;而我們在臨床工作中發(fā)現(xiàn)苯扎溴銨具有破壞膀胱粘膜的能力，因此我們推測苯扎溴銨有作為新的膀胱灌注藥物的潛在可能。本文通過以人膀胱腫瘤5637細(xì)胞系為研究對象，以正常膀胱粘膜永生化SV-HUC-1細(xì)胞系為

2、細(xì)胞對照，絲裂霉素C、卡介苗作為藥物對照，深入研究苯扎溴銨作用上述細(xì)胞后對其生物學(xué)特性（增殖、凋亡、遷移能力、免疫因子分泌）的影響，并對線粒體介導(dǎo)的caspase依賴和非caspase依賴的細(xì)胞凋亡通路信號的變化情況進(jìn)行檢測，以期為苯扎溴銨作用5637細(xì)胞的情況進(jìn)行較為深入的研究。
　　方法:1）用MTT、FCM方法檢測苯扎溴銨對5637細(xì)胞的增殖、凋亡和細(xì)胞周期的影響。
　　2)用劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell實(shí)驗(yàn)檢測苯扎溴

3、銨對5637細(xì)胞遷移能力的影響。
　　3)以卡介苗作為對照，采用雙抗體夾心ELISA法及real timequantative PCR法檢測苯扎溴銨作用5637細(xì)胞后IL-2、IL-6、IL-8、TNF-a的分泌水平。
　　4)采用real time quantative PCR法對苯扎溴銨誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡過程中線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡信號通路中Caspase依賴性的的幾個(gè)關(guān)鍵基因cytc、apaf-1、caspase-9和casp

4、ase-3以及非caspase依賴的PARP-1/AIF、EndoG基因進(jìn)行檢測。
　　結(jié)果:1）根據(jù)濃度的不同，苯扎溴銨可直接導(dǎo)致細(xì)胞壞死或凋亡。低濃度苯扎溴銨對細(xì)胞的影響包括抑制增殖，誘導(dǎo)凋亡和細(xì)胞周期阻滯，并在一定范圍內(nèi)呈時(shí)間和劑量依賴性。苯扎溴銨對SV-HUC-1細(xì)胞的上述作用要弱于5637細(xì)胞。5-10μg/ml的苯扎溴銨與100μg/ml濃度的絲裂霉素C在體外對5637細(xì)胞的增殖抑制作用及凋亡誘導(dǎo)作用效果相當(dāng)。藥物作用

5、24小時(shí)時(shí)，1.25-2.5ug/ml的苯扎溴銨與100μg/ml絲裂霉素C的G0/G1期阻滯作用相當(dāng);作用48小時(shí)時(shí)其G0/G1期阻滯作用則強(qiáng)于絲裂霉素C。
　　2)苯扎溴銨能夠誘導(dǎo)IL-2，IL-6，IL-8，TNF-a四種細(xì)胞因子的分泌，培養(yǎng)基中細(xì)胞因子的濃度隨著處理時(shí)間的延長和藥物濃度的增加而提高，并能基本達(dá)到陽性對照卡介苗組的細(xì)胞因子水平。
　　3)苯扎溴銨對5637細(xì)胞遷移能力產(chǎn)生一定影響，而且濃度越高，抑制作用

6、有越強(qiáng)的趨勢，且與100ug/ml絲裂霉素C相比，2.5ug/ml苯扎溴銨的遷移抑制作用有更強(qiáng)的趨勢。
　　4)苯扎溴銨作用5637細(xì)胞后cytc、apaf-1、caspase-9、caspase-3基因的表達(dá)量均上調(diào)，但PARP-1、AIF、Endo G基因的表達(dá)變化無明顯規(guī)律。
　　結(jié)論:苯扎溴銨對膀胱癌細(xì)胞的可起到抗增殖、誘導(dǎo)凋亡和周期阻滯的作用，亦降低了膀胱癌細(xì)胞的體外遷移能力，同時(shí)具有刺激免疫因子分泌的作用，其通過