HRSV純化條件的探索及實(shí)驗(yàn)性疫苗免疫原性的初步評價.pdf

1、人類呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)是世界范圍內(nèi)引起各年齡組下呼吸道感染的重要病毒病原體之一,尤見于嬰幼兒、老年人和免疫抑制個體,但臨床上至今尚無安全有效的疫苗。本課題的研究目的是篩選出一種或幾種HRSV的理想純化方法,并對不同純化產(chǎn)物進(jìn)行免疫原性評價,為HRSV裂解純化疫苗的研制積累一定的基礎(chǔ)資料。研究內(nèi)容主要包括:HRSV在人二倍體KMB17細(xì)胞上的大量繁殖、病毒收獲液的

2、超濾濃縮、HRSV不同方法的純化和純化條件的探索,以及純化產(chǎn)物的免疫原性評價,并對滅活劑、佐劑和免疫程序等免疫原性的影響因素進(jìn)行探索。
　　 使用細(xì)胞工廠和羅氏瓶兩種容器培養(yǎng)HRSV,兩者均可獲得較高感染性滴度的病毒。細(xì)胞工廠培養(yǎng)HRSV的最佳條件還需進(jìn)一步探索。
　　 將病毒收獲液以100kD濾膜包超濾濃縮30倍和103倍后,分別使用蔗糖密度梯度離心法和Sepharose4FF凝膠過濾層析法進(jìn)行純化,并對純化產(chǎn)物進(jìn)行感

3、染性滴度檢測、SDS-PAGE還原電泳分析及Western blot鑒別。經(jīng)還原電泳,2種純化方法制備的純化產(chǎn)物都在60～70kD間呈現(xiàn)一主要條帶,Western blot證實(shí)為HRSV特異性F蛋白。結(jié)果表明Sepharose4FF凝膠過濾層析法比蔗糖密度梯度離心法更適合于HRSV的純化,效果更好、效率更高。但柱體積、上樣量、洗脫流速等條件會對純化效果產(chǎn)生影響。
　　 將蔗糖密度梯度離心和Sepharose4FF凝膠過濾層析2種

4、方法純化HRSV所得樣品免疫ICR小鼠,抗體陽轉(zhuǎn)率相同,中和抗體幾何平均效價(GMT)相近,雖然免疫劑量不同(前者的病毒蛋白含量是后者的2.5倍),但二者的免疫原性無統(tǒng)計學(xué)差異,說明Sepharose4FF凝膠過濾層析法純化產(chǎn)物的免疫原性較高。
　　 在純化樣品的免疫原性影響因素的探索中,甲醛滅活組的抗體陽轉(zhuǎn)率和中和抗體GMT都比β-丙內(nèi)酯滅活組的高；鋁佐劑對實(shí)驗(yàn)性疫苗的免疫原性影響不大；雖然0d、7d、14d和0d、28d兩個