GDNF基因修飾的神經(jīng)干細(xì)胞移植對(duì)大鼠腦缺血突觸后致密物質(zhì)影響的研究.pdf

1、目的：探討轉(zhuǎn)染膠質(zhì)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子GDNF(glial cell line-derivedneurotrophic factor，GDNF)的神經(jīng)干細(xì)胞移植對(duì)大鼠局灶性腦缺血的神經(jīng)保護(hù)作用，以及是否通過(guò)增加突觸后致密物質(zhì)95(post-synapticdensity95，PSD95)蛋白表達(dá)而促進(jìn)神經(jīng)組織重塑。 方法：建立大鼠暫時(shí)性大腦中動(dòng)脈梗塞模型(middle cerebral artery occlusion，MCAO)，

2、并將其隨機(jī)分成： (1)生理鹽水組(NS組)； (2)GDNF腺病毒移植組(GDNF/Ad組)； (3)神經(jīng)干細(xì)胞移植組(NSCs組)； (4)GDNF基因修飾的神經(jīng)干細(xì)胞移植組(GDNF/NSCs組)。 前2組再灌注1w處死大鼠，后2組根據(jù)再灌注時(shí)間不同分為1w、2w、3w、5w、7w個(gè)亞組，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)5只大鼠。缺血再灌注3d采用腦立體定位儀將移植物植入大鼠的右側(cè)腦室。移植后1～7周進(jìn)行神經(jīng)損害

3、嚴(yán)重程度評(píng)分(neurological severity score，NSS)。用免疫組化(immunohistochemistry，IHC)染色觀察PSD95蛋白表達(dá)并對(duì)PSD95免疫染色進(jìn)行光密度測(cè)定，半定量統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果： 1．NSS評(píng)分：各移植組在移植后均比移植前有不同程度下降，GDNF/NSCs、NSCs和GDNF/Ad的NSS評(píng)分比NS組下降。GDNF/NSCs與NSCs移植組在整個(gè)研究時(shí)間范圍內(nèi)表現(xiàn)趨勢(shì)相

4、似，再灌注2w、3w、5w、7w與1w及移植前相比NSS顯著降低。與NSCs組相比再灌注2w、3w GDNF/NSCs組的NSS評(píng)分顯著降低(P<0.01)。 2．PSD95免疫組化染色結(jié)果：PSD95免疫產(chǎn)物表達(dá)于神經(jīng)元胞體、神經(jīng)纖維。各組均有PSD95表達(dá)且持續(xù)七周，在缺血皮質(zhì)右項(xiàng)葉(主要為S1、S2區(qū)域)、紋狀體、海馬和下丘腦處分布廣泛。在缺血皮質(zhì)、紋狀體和下丘腦，再灌注1w和2w，NSCs組和GDNF/NSCs組的PSD

5、95表達(dá)增加不明顯；再灌注3w，PSD95免疫著色增強(qiáng)，廣泛表達(dá)于神經(jīng)元和纖維；再灌注5w、7w，PSD95免疫著色減弱，僅表達(dá)于部分的神經(jīng)元和纖維。統(tǒng)計(jì)分析顯示：再灌注1～3w，NSCs組和GDNF/NSCs的PSD95平均光密度值增加，3w時(shí)達(dá)高峰，再灌注5～7w下降。GDNF/NSOs組的PSD95的平均光密度值顯著高于NSCs組(P<0.05)。 結(jié)論：GDNF/NSCs組對(duì)局灶性腦缺血損傷有神經(jīng)保護(hù)作用優(yōu)于單純神經(jīng)干細(xì)