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文檔簡介
1、目的:觀察腺病毒增強轉鐵蛋白受體介導法(AVET)將針對突變型p53(mtp53)的大酶(Maxizyme,Mz)基因轉入肝癌細胞后對肝癌細胞凋亡的影響,探索AVET用于肝癌基因治療的可行性.方法:選用帶有mtp53基因的人肝癌細胞株MHCC97細胞,常規(guī)條件下培養(yǎng).將培養(yǎng)的肝癌細胞接種于24孔培養(yǎng)板內(nèi),分為5組:①空白對照組:不加任何干預;②脂質體轉染核酶對照組(lipo-pEGFPMz);③脂質體轉染空載體組(lipo-pEGFP)
2、;④AVET轉染核酶組(AVET-pEGFPMz);⑤AVET轉染空載體組(AVET-pEGFP).轉染后48小時,熒光顯微鏡觀察細胞轉染情況,逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測mtp53表達水平的變化,DNA瓊脂糖凝膠電泳和流式細胞儀檢測轉染后對細胞凋亡的影響.結論:腺病毒增強轉鐵蛋白受體介導的基因轉移系統(tǒng)可將pEGFP-Maxizyme有效的轉染到肝癌細胞株MHCC97中,Maxizyme在細胞內(nèi)成功的切割了mtp53 mRNA
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