低氧誘發(fā)人肝細(xì)胞癌HepG-2中IAP-2和HIF-1表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文低氧誘發(fā)人肝細(xì)胞癌HepG-2中IAP-2和HIF-1表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究姓名：谷華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：消化內(nèi)科指導(dǎo)教師：趙秋;劉南植20060401華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院 碩士學(xué)位論文低氧誘發(fā)人肝細(xì)胞癌H e p G - 2 中I A P 一2和H I F - 1 表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究中文摘要目的：研究極度低氧下人肝細(xì)胞癌H e p G - 2 中凋亡抑制蛋I 芻- 2 ( I A P - 2 ) 表達(dá)的變化，初步探討

2、其與缺氧誘導(dǎo)因子一l ( m F - 1 ) 的相關(guān)性。方法：H c p G 一2 細(xì)胞株分組孵育：常氧組，體積分?jǐn)?shù)為2 ％0 2 + 5 ％C 0 2 + 9 3 ％N 2 低氧組4 h ，9 5 ％N 2 + 5 ％C 0 2 極度低氧組l h ，，3 h ，5 h ，9 5 ％N 2 + 5 ％C 0 2 極度低氧3 h 后復(fù)氧，另取一組加入3 0 0 1 a m o l ／l 氯化鈷常氧孵育。用細(xì)胞免疫化學(xué)定性檢測(cè)I A P ．

3、2 蛋白表達(dá)；蛋白裂解液提取胞質(zhì)胞核蛋白，用W e s t e r n b l o t 檢測(cè)I A P ．2 蛋白水平變化，同時(shí)對(duì)比H I F ．1 蛋白表達(dá)：用R T - P C R 檢測(cè)l A P ．2 基因水平改變。結(jié)果：免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)l A P 一2 蛋白在H e p G - 2 細(xì)胞中呈陽(yáng)性表達(dá)，定位于胞質(zhì)。W e s t e r nb l o t 顯示常氧、低氧4 h 可檢測(cè)到I A P ．2 蛋白，表達(dá)無差異，極度低氧l

4、 hI A P 一2 蛋白表達(dá)明顯增加( 仁5 ．7 2 3 ，P < 0 ，0 5 ) ，3 h ，5 hI A P ．2 持續(xù)高表達(dá)，各時(shí)間段無顯著性差異，復(fù)氧后恢復(fù)基線水平。實(shí)驗(yàn)還顯示了H I F ．1 和l A P ．2 蛋白的表達(dá)差異：常氧組H I F —l 未表達(dá)，低氧4 h 可誘發(fā)，l A P ．2 保持基線水平；極度低氧H I F —l無變化，l A P 一2 表達(dá)明顯增高；復(fù)氧后H I F ．1 不表達(dá)，I A

5、P ．2 恢復(fù)基線表達(dá)；加入氯化鈷后H I F —l 恢復(fù)表達(dá)，l A P 一2 保持基線，初步表明I A P - 2 蛋白表達(dá)上調(diào)有獨(dú)立于H I F —l 的作用機(jī)制。R T - P C R 檢測(cè)表明，極度低氧l hl A P 一2 m R N A 表達(dá)明顯高于常氧組( t = 7 ．0 9 7 ，P < 0 ．0 5 ) ，3 h ，5 h l A P ．2 持續(xù)高表達(dá)，復(fù)氧后恢復(fù)基線水平。該結(jié)果與上述I A P 一2 蛋白表