五個質子泵抑制劑對映體的分離及大鼠體內藥動學研究.pdf

1、手性藥物的生物活性與其立體構型密切相關。目前新藥研究的一個發(fā)展趨勢是研制和生產光學純的藥物。手性藥物的研究已成為國際新藥研究的方向之一。手性藥物分析在手性藥物研究中作用越來越重要，已成為國際上分析科學中的熱點和難點。本文以質子泵抑制劑泰妥拉唑、泮托拉唑、蘭索拉唑、雷貝拉唑和奧美拉唑為研究對象，建立了對映體分離測定的毛細管電泳法和高效液相色譜法，制定了(-)-泰妥拉唑和(-)-泮托拉唑光學純度的檢測方法，初步研究了泰妥拉唑對映體在大鼠體內

2、的立體選擇性藥物動力學過程，為此類手性藥物的研究開發(fā)奠定了基礎。 1.毛細管區(qū)帶電泳法分離四個質子泵抑制劑對映體 采用以負電的磺丁基醚-β-環(huán)糊精(SBE-β-CD)為手性選擇劑的毛細管區(qū)帶電泳法對泰妥拉唑、雷貝拉唑、蘭索拉唑和泮托拉唑對映體進行了手性分離研究?？疾炝谁h(huán)糊精種類和濃度、背景電解質的pH、有機改性劑種類和濃度等因素對分離的影響。在背景電解質為50mmol/L硼砂-150mmol/L磷酸二氫鈉(含40mg/m

3、LSBE-β-CD，pH6.5)，分離電壓為10kV的條件下，四個質子泵抑制劑對映體實現了基線分離。測定了四個質子泵抑制劑對映體與SBE-β-CD的結合常數，證明了兩對映體與SBE-β-CD結合常數的不同是實現手性分離的主要機制。對泰妥拉唑對映體的手性分離方法進行了方法學確證，兩對映體濃度在0.65～100μg/mL范圍內與峰面積呈良好的線性關系(r2≥0.9994)，兩個對映體的最低檢測限和定量限分別為0.2和0.65μg/mL，方法

4、的日內、日間精密度(RSD)均小于3.0％，回收率在91.6～100％之間。該方法應用于(-)-泰妥拉唑樣品的對映體過量百分率測定。 2.手性流動相添加劑高效液相色譜法分離泮托拉唑對映體 采用以SBE-β-CD為手性流動相添加劑的高效液相色譜法對泮托拉唑對映體進行手性分離研究?？疾炝薙BE-β-CD的濃度，緩沖溶液的種類、濃度和pH，有機改性劑的種類和濃度等因素對分離的影響。最后確定分離條件為：在SpherigelC18

5、色譜柱(150mm＋4.6mm，Sμm)上，流動相為10mmol/L磷酸二氫鉀(含20mg/mLSBE-β-CD，pH2.5)-乙腈(85：15，v/v)，流速為0.9mL/min，柱溫為室溫，檢測波長為290nm的條件下，泮托拉唑對映體在15min內分離度達到2.1。按照ICH指導原則對(-)-泮托拉唑中(+)-異構體雜質的定量測定進行方法學確證，(+)-泮托拉唑的濃度在0.5～6.0μg/mL范圍內與峰面積呈良好的線性關系(r2=0

6、.9991)，(+)-泮托拉唑的檢測限和定量限分別為0.2和0.5μg/mL，方法的日內、日間精密度(RSD)小于3.6％，回收率在92.1～101％之間。該方法應用于(-)-泮托拉唑原料藥中(+)-泮托拉唑的定量測定。 3.手性配體交換高效液相色譜法分離五個質子泵抑制劑對映體． 采用手性配體交換高效液相色譜法對泰妥拉唑、泮托拉唑、蘭索拉唑、雷貝拉唑和奧美拉唑對映體進行手性分離研究?？疾炝伺潴w的種類、配體與金屬離子的比例

7、和濃度、有機改性劑的種類和濃度、流動相pH等因素對手性分離的影響。在流動相為1mmol/LL-組氨酸，0.5mmol/L醋酸銅(pH7.0)-乙腈(75：25，v/v)，流速1.0mL/min條件下，奧美拉唑，泮托拉唑，雷貝拉唑和蘭索拉唑實現基線分離。在上述條件下，將乙腈含量調整為18％，泰妥拉唑對映體實現基線分離。應用分子模擬構建了三元配合物的最低能量構型，通過量化計算證明了質子泵抑制劑對映體與Cu2+和L-組氨酸形成三元配合物的穩(wěn)定

8、性差異是實現對映體分離的主要分離機制。 4.手性固定相高效液相色譜法分離四個質子泵抑制劑對映體 應用多糖類手性色譜柱ChiralpakAS-H和大環(huán)糖肽抗生素類手性色譜柱ChirobioticV為固定相對泰妥拉唑、泮托拉唑、蘭索拉唑和奧美拉唑對映體進行了手性分離研究。采用ChiralpakAS-H手性固定相時，考察了流動相組成和柱溫對手性分離的影響。在流動相為正己烷-乙醇-三乙胺(20：80：0.1％，v/v/v)，流速

9、為0.4mL/min，柱溫為40℃的條件下，四個質子泵抑制劑對映體在15min內實現分離度大于3.3的基線分離?？疾炝舜四Ｊ较滤膫€質子泵抑制劑對映體的熱力學參數的變化，證明了其與固定相之間的相互作用均是焓控過程。質子泵抑制劑與ChiralpakAS-H固定相之間的空間作用是實現對映體分離的最主要分離機制。采用ChirobioticV手性固定相時，以泰妥拉唑為代表，考察了分離模式、流動相組成和柱溫等因素對分離的影響。在流動相為20mmol

10、/L醋酸銨-四氫呋喃(93：7，v/v，pH6.0)，流速為0.5mL/min，溫度為20℃的條件下，泰妥拉唑實現基線分離，其它三個質子泵抑制劑對映體得到部分分離。考察了此模式下泰妥拉唑熱力學參數的變化，證明了其與固定相之間的相互作用是焓控過程。比較兩種手性固定相的分離結果，ChiralpakAS-H更適合質子泵抑制劑手性藥物對映體的分離。 5.大鼠血漿泰妥拉唑對映體的測定和立體選擇性藥物動力學初步研究 建立非手性-手性