蒲公英黃酮抗LPS誘發(fā)的大鼠乳腺炎作用研究.pdf

1、為了研究蒲公英的抗炎作用及其主要抗炎成分，本論文對(duì)蒲公英進(jìn)行有效成分分離和抗炎成分篩選，通過檢測(cè)乳腺炎大鼠血清中炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10的含量變化以及乳腺組織中NF-κB的蛋白表達(dá)，探討蒲公英的有效抗炎成分及其對(duì)NF-κB炎癥信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)節(jié)作用。采用傳統(tǒng)水提法，超聲波提取法和有機(jī)溶劑回流萃取等方法，對(duì)蒲公英的干燥全草進(jìn)行粗提，大孔樹脂吸附法分離純化有效成分。分離并獲得了蒲公英黃酮、蒲公英酚酸、蒲公英多

2、糖、蒲公英甾醇4種有效成分。通過小鼠急性炎癥模型（二甲苯致耳腫脹）篩選并確定蒲公英黃酮為蒲公英的主要抗炎有效成分。通過小鼠二甲苯致耳腫脹試驗(yàn)、大鼠蛋清致足腫脹試驗(yàn)和大鼠棉球肉芽腫增生試驗(yàn)評(píng)價(jià)蒲公英黃酮對(duì)急慢性炎癥的抑制效果。結(jié)果顯示，蒲公英黃酮能夠顯著抑制二甲苯致小鼠耳廓腫脹且高劑量組的抑制率高達(dá)83.84％;蒲公英黃酮能夠顯著抑制蛋清致大鼠足趾腫脹和大鼠棉球肉芽腫的形成。表明蒲公英黃酮對(duì)于急、慢性炎癥均具有良好的抑制作用，且高劑量組的

3、蒲公英黃酮抗炎效果最好。
　　進(jìn)一步研究中，向大鼠乳導(dǎo)管灌注脂多糖(LPS)，建立人鼠乳腺炎癥損傷模型。試驗(yàn)處理為:空白對(duì)照組（生理鹽水，0.2 mL/20g體重）、LPS模型組（生理鹽水，0.2 mL/20g體重）、蒲公英黃酮（0.1 mL/20g體重、0.2 mL/20g體重、0.4 mL/20g體重）+LPS實(shí)驗(yàn)組和氫化可的松（0.2 mL/20g體重）+LPS組，各組大鼠在乳導(dǎo)管灌注LPS前1h和灌注后12h分別給藥一次，

4、灌注LPS24 h后，觀察大鼠乳腺的臨床病變，采血，收取乳腺組織并用中性甲醛固定，經(jīng)水洗、脫水、透明包埋等一系列操作后，做病理組織學(xué)切片和免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)，觀察乳腺組織的病理變化和組織中I-κB和NF-κB分布;采用酶聯(lián)免疫吸附劑(ELISA)法檢測(cè)血清中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10的含量。結(jié)果顯示，肉眼觀察LPS誘導(dǎo)組大鼠乳腺組織出現(xiàn)明顯的紅、腫、充血等癥狀;組織病理切片與免疫組織切片觀察，LPS誘導(dǎo)組大鼠乳腺腺泡壁明

5、顯增厚，腺泡內(nèi)有大量嗜中性粒細(xì)胞;乳腺組織中NF-κB與I-κB活性明顯升高;且大鼠血清中3種促炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量顯著上升。與LPS刺激組相比，蒲公英黃酮能明顯減輕LPS誘導(dǎo)的大鼠乳腺組織的炎性損傷;減少NF-κB與1-κB的分布;下調(diào)了TNF-α、IL-1β和IL-6基因和蛋白表達(dá)水平;提高了IL-10的蛋白表達(dá)水平;抑制了NF-κB信號(hào)通路的激活。
　　通過上述研究，本論文對(duì)蒲公英黃酮體內(nèi)抗炎作