5類中藥新藥開郁寧片的制備工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.pdf

1、目的：按照中藥5類新藥注冊(cè)申報(bào)的相關(guān)規(guī)定，對(duì)貫葉金絲桃有效部位藥學(xué)研究部分的主要內(nèi)容進(jìn)行了研究，為建立制定貫葉金絲桃有效部位的制備工藝、開郁寧片的成型工藝、貫葉金絲桃藥材總黃酮的含量測(cè)定方法及貫葉金絲桃提取物和開郁寧片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，提供方法學(xué)的研究基礎(chǔ)條件及數(shù)據(jù)。 方法：用單因素考察實(shí)驗(yàn)和L<,9>(3<'4>)的正交實(shí)驗(yàn)研究方法，對(duì)貫葉金絲桃有效部位中的乙醇粗提、乙酸乙酯回流提取、大孔樹脂純化及干燥等提取制備工藝條件，開郁寧片的

2、粘合劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑及助流劑的類型及用量等制劑成型工藝條件，進(jìn)行了優(yōu)化研究。用薄層色譜法、高效液相色譜法及紫外-分光光度法對(duì)貫葉金絲桃、貫葉金絲桃提取物和開郁寧片中的蘆丁、槲皮素、金絲桃苷及總黃酮，進(jìn)行了定性定量的研究。 結(jié)果：確定貫葉金絲桃提取物提取工藝為：50％乙醇回流提取3次，每次10倍量50％乙醇，回流1小時(shí)，濾過，合并濾液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得貫葉金絲桃醇浸膏粉，加乙酸乙酯回流提取三次，每次10倍量乙酸乙酯，回流

3、提取1小時(shí)，濾過，合并濾液，減壓濃縮，得乙酸乙酯提取物。乙酸乙酯提取殘留浸膏粉加10倍量蒸餾水60℃加熱溶解，減壓濃縮至原體積的0.8倍量，冷至室溫，濾過，濾液通過已處理好的D101大孔樹脂柱，再用水及40％乙醇洗脫，收集第二和第三個(gè)柱體積40％乙醇的洗脫液，減壓濃縮，得40％乙醇洗脫物。將乙酸乙酯提取物和40％乙醇洗脫物混勻，于60℃減壓干燥24小時(shí)，粉碎，過80目篩，即得貫葉金絲桃提取物，其收得率為6.04％，總黃酮轉(zhuǎn)移率為51.6

4、6％，金絲桃苷轉(zhuǎn)移率為56.94％。貫葉金絲桃提取物按5:3的比例加入微晶纖維素及適量50％乙醇混勻，制粒，干燥，再加入23％羧甲基淀粉鈉、0.5％硬脂酸鎂、1.5％滑石粉時(shí)，壓制素片。加入4％的GAIEB12E包衣材料包衣，即得開郁寧片。蘆丁、金絲桃苷、槲皮素為對(duì)照品，于聚酰胺薄膜片上以乙醇-甲酸(50:1)展開，三氯化鋁試液顯色，對(duì)貫葉金絲桃提取物及開郁寧片檢識(shí)，紫外燈(365nm)下，供試品色譜中在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上均清晰出

5、現(xiàn)相同顏色斑點(diǎn)。貫葉金絲桃、貫葉金絲桃提取物和開郁寧片的總黃酮含量測(cè)定方法選用分光光度法，檢測(cè)波長(zhǎng)為500nm，以蘆丁為對(duì)照品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)對(duì)貫葉金絲桃、貫葉金絲桃提取物和開郁寧片的六個(gè)批次進(jìn)行測(cè)定計(jì)算，貫葉金絲桃、貫葉金絲桃提取物及開郁寧片總黃酮含量以無水蘆丁計(jì)分別不低于63mg/g、630mg/g及80mg/片。貫葉金絲桃提取物及開郁寧片中的黃酮單體化合物含量測(cè)定方法選用高效液相色譜法，以蘆丁、金絲桃苷和槲皮素為對(duì)照品，以十八烷基

6、硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.5％磷酸溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，經(jīng)對(duì)貫葉金絲桃提取物和開郁寧片的六個(gè)批次進(jìn)行測(cè)定計(jì)算，貫葉金絲桃提取物的蘆丁、金絲桃苷和槲皮素含量分別不低于5％、3.5％和3.5％，開郁寧片的分別不低于6.2mg/片、4.3mg/片和4.5mg/片。結(jié)論：按貫葉金絲桃的提取制備工藝和開郁寧片的制劑成型工藝進(jìn)行三次中試，其收得率為6.04％，總黃酮轉(zhuǎn)移率為51.66％，崩解時(shí)限為40分鐘，片重差異

7、為4.0％，三批中試結(jié)果表明，該工藝制備開郁寧片，具有工藝較為簡(jiǎn)便且穩(wěn)定可行，具有提取物收得率及總黃酮含量較高的特點(diǎn)，可供大規(guī)模生產(chǎn)使用。 六個(gè)批次的貫葉金絲桃提取物和開郁寧片的蘆丁、金絲桃苷和槲皮素的薄層色譜定性分析結(jié)果表明，其斑點(diǎn)清晰，分離度、專屬性及重現(xiàn)性均較好。 分光光度法對(duì)總黃酮進(jìn)行含量測(cè)定的方法學(xué)研究結(jié)果顯示，其相關(guān)系數(shù)為0.9992，貫葉金絲桃、貫葉金絲桃提取物和開郁寧片的平均回收率分別為98.416％(R

8、SD 1.95％)，97.9％(RSD 2.18％)和97.1％(RSD 1.42％)。高效液相色譜法對(duì)蘆丁、金絲桃苷、槲皮素進(jìn)行含量測(cè)定的方法學(xué)研究結(jié)果顯示，其相關(guān)系數(shù)分別為0.99994、0.99999和0.99999，貫葉金絲桃提取物中這3個(gè)單體化合物的平均回收率分別和99.09％(RsD 1.29％)，98.87％(RSD 1.81％)和99.39％(RSD 0.61％)；開郁寧片中這3個(gè)單體化合物的平均回收率分別99.84％(