華蟾素誘導人宮頸癌Caski細胞免疫原性死亡的實驗研究.pdf

1、　　目的：探討抗癌中藥華蟾素對宮頸癌Caski細胞免疫原性死亡的影響,為建立抗癌中藥誘導的腫瘤細胞免疫治療新方法提供理論支持和實驗數(shù)據(jù)。
　　方法：(1) MTT法分析細胞增殖；(2)流式細胞術(shù)分析細胞周期和鑒定凋亡細胞；(3)瓊脂糖凝膠電泳分析DNA片段化；(4)Western Blot分析不同濃度藥物處理后細胞胞漿中細胞色素C的含量；(5)熒光顯微鏡下觀察細胞中活性氧的含量變化；(6)多功能熒光酶標儀檢測線粒體膜電位；(7

2、)細胞劃線實驗分析細胞的遷移能力；(8)免疫熒光和流式細胞術(shù)檢測細胞膜上鈣網(wǎng)蛋白的表達。
　　結(jié)果：(1)華蟾素能夠顯著性抑制Caski細胞的增殖和遷移能力,抑制效應呈時間和劑量依賴性,其48h小時的半數(shù)抑制濃度值(IC50)為1.68mg/ml；(2)華蟾素干擾細胞周期,G2/M期細胞比例顯著性升高,G1期細胞比例顯著性下降,同時凋亡細胞數(shù)量大幅增加；(3)華蟾素處理后,細胞染色體DNA出現(xiàn)凋亡細胞典型的DNA片段化現(xiàn)象,同

3、時伴有細胞線粒體膜電位降低、細胞色素C由線粒體向細胞質(zhì)釋放；(4)與對照組相比,經(jīng)華蟾素處理組細胞內(nèi)活性氧含量明顯增加；(5)細胞劃痕實驗表明華蟾素能夠抑制細胞的遷移；(6)華蟾素能夠誘導鈣網(wǎng)蛋白(CRT)發(fā)生膜轉(zhuǎn)位。
　　結(jié)論： 華蟾素具有抑制人宮頸癌Caski細胞增殖的藥理活性,其機制與抑制細胞周期和誘導細胞凋亡有關(guān), 并且華蟾素能夠誘導鈣網(wǎng)蛋白從腫瘤細胞內(nèi)轉(zhuǎn)位到細胞膜上并發(fā)生簇集。提示,華蟾素能誘導Caski 細胞發(fā)生免