MLT對(duì)銀黑狐卵巢組織學(xué)及卵母細(xì)胞體外成熟影響的研究.pdf

1、為探索銀黑狐卵巢組織結(jié)構(gòu)及發(fā)育規(guī)律和卵母細(xì)胞IVM的培養(yǎng)條件，及褪黑激素(Melatonin，MLT)對(duì)銀黑狐卵巢組織及卵母細(xì)胞IVM的影響，旨在為銀黑狐生殖系統(tǒng)的研究提供一定參考及為銀黑狐卵母細(xì)胞相關(guān)試驗(yàn)研究開辟一條卵巢獲取新途徑。試驗(yàn)于2013年11～12月，采集常規(guī)飼養(yǎng)條件下，埋植MLT和未埋植MLT健康一歲齡雌性銀黑狐卵巢各80枚，其中分別取12枚卵巢制備石蠟切片進(jìn)行顯微結(jié)構(gòu)觀察，兩組各觀察原始卵泡42個(gè)，初級(jí)卵泡42個(gè)，次級(jí)卵

2、泡36個(gè)，三級(jí)卵泡30個(gè)，成熟卵泡30個(gè)；兩組分別取10枚制備超薄切片進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)觀察，平均每個(gè)卵巢觀察原始卵泡4～5個(gè)，初級(jí)卵泡3～4個(gè)，次級(jí)卵泡2～3個(gè)，三級(jí)卵泡2個(gè)，成熟卵泡1個(gè)；兩組剩余的58枚卵巢進(jìn)行卵母細(xì)胞IVM培養(yǎng)，分別探討添加不同濃度EGF、FSH+LH、GnRH和PMSG+HCG、MLT對(duì)銀黑狐卵母細(xì)胞IVM的影響。研究結(jié)果表明：
　　1.埋植MLT和未埋植MLT銀黑狐卵巢的被膜、皮質(zhì)和髓質(zhì)的顯微結(jié)構(gòu)相同，各級(jí)卵

3、泡和卵母細(xì)胞的直徑差異不顯著（P＞0.05）；初級(jí)卵泡階段開始出現(xiàn)透明帶物質(zhì)，至次級(jí)卵泡階段發(fā)育完整，隨卵泡發(fā)育透明帶的厚度逐漸增厚，二者腔前卵泡卵母細(xì)胞透明帶厚度差異不顯著（P＞0.05），而埋植MLT的銀黑狐有腔卵泡卵母細(xì)胞的透明帶厚度顯著高于未埋植MLT的（P＜0.05）。由此說(shuō)明，MLT對(duì)銀黑狐卵巢的一般顯微結(jié)構(gòu)和腔前卵泡發(fā)育無(wú)影響，但對(duì)有腔卵泡的發(fā)育有一定促進(jìn)作用。
　　2.埋植MLT和未埋植MLT的銀黑狐原始卵泡卵母細(xì)

4、胞內(nèi)均有少量線粒體和高爾基體，而未埋植MLT的銀黑狐卵母細(xì)胞中還可見(jiàn)少量滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)；初級(jí)卵泡卵母細(xì)胞內(nèi)，均開始形成不完整透明帶，線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)數(shù)量均有所增加，沿透明帶出現(xiàn)少量皮質(zhì)顆粒；次級(jí)卵泡階段，未埋植MLT銀黑狐卵母細(xì)胞透明帶中微絨毛數(shù)量較埋植MLT的多；三級(jí)卵泡兩者透明帶厚度繼續(xù)增加，高爾基體幾乎消失；成熟卵泡階段線粒體移到皮質(zhì)淺區(qū)，高爾基體完全消失，皮質(zhì)顆粒沿質(zhì)膜分布。MLT對(duì)休情期銀黑狐卵巢卵母細(xì)胞的線粒體、脂滴、高爾基體、皮

5、質(zhì)顆粒等細(xì)胞器沒(méi)有影響，僅對(duì)初級(jí)卵泡階段滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的發(fā)育有一定影響。
　　3.以M199為基礎(chǔ)培養(yǎng)液，EGF添加濃度為12 ng/ml，培養(yǎng)36 h，添加FSH+LH時(shí)卵丘擴(kuò)散率最高（71.87±2.95）％，顯著高于其余三組（P＜0.05）；添加PMSG+HCG時(shí)第一極體排出率最高（4.59±0.52）%，顯著高于GnRH組和無(wú)激素組。
　　4.添加FSH+LH、PMSG+HCG和GnRH時(shí)，埋植MLT和未埋植MLT的銀黑