埋植MLT銀黑狐的卵巢組織學及卵母細胞體外成熟的研究.pdf

1、HistologicalstudyonovaryofMLTHiddeninVulpesFulvaanditsoocytesinvitromaturationThesissubmittedtoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyWangXiao(CollegeofAnimalScienceandVet

2、erinaryMedicine)Supervisor：MaZefangCuiKaiQingdaoChina青島農業(yè)，J、學碩士學融淪文摘要埋植MLT銀黑狐的卵巢組織學及卵母細胞體外成熟的研究成熟的研冤摘要為了探究休情期埋植褪黑激素(Melatonin，MLT)銀黑狐卵巢能否用于體外成熟(IVM)，進行了卵巢組織學和卵母細胞IVM的研究，為體外受精和胚胎移植等生物工程奠定基礎，并為卵巢獲取開辟了另一條新途徑。試驗于2012年11月中旬，采

3、集30只8月齡，埋植MLT的健康雌性銀黑狐卵巢共計60枚。隨機選取10只銀黑狐的左側10枚卵巢，用于觀察卵泡以及卵母細胞顯微結構，并用目鏡測微尺測量各級卵泡和卵母細胞的直徑，平均每個卵巢觀察并測量原始卵泡6～8個、初級卵泡5～7個、次級卵泡6～8個、三級卵泡5～7個、成熟卵泡l～3個：右側10枚卵巢，用于觀察各級卵泡發(fā)育過程中卵母細胞超顯微結構，平均每個卵巢觀察原始卵泡6～7個、初級卵泡4～6個、次級卵泡3～4個、三級卵泡2～3個、成熟

4、卵泡I～2個；其余40枚卵巢用作卵母細胞體外培養(yǎng)，以TCMl99作為IVM基礎培養(yǎng)液，添加FSH、LH、GnRH、HCG、PMSG的不同激素組合以及37℃、39℃兩種不同培養(yǎng)溫度、不同卵泡直徑，探究不同因素對銀黑狐卵母細胞體外成熟率的影響。研究結果表明：1埋植MLT銀黑狐卵巢顯微結構分為被膜、皮質和髓質三部分，被膜由外層生殖上皮和內層白膜兩部分組成，在皮質分布著大量的生殖腺和不同發(fā)育階段的卵泡，髓質由疏松結締組織構成，含有少量平滑肌、神

5、經和豐富的血管、淋巴管。卵泡和卵母細胞的平均直徑范圍分別為3725“一56677岬和3113～11205岬，透明帶平均直徑范圍是334“824岬。原始卵泡時，未見透明帶結構；初級卵泡時，顆粒細胞與卵母細胞之前出現(xiàn)不完整的透明帶：次級卵泡顆粒細胞之間逐漸出現(xiàn)一些大小不等的腔隙，未形成完整的卵泡腔，透明帶增厚并趨于完整：三級卵泡顆粒細胞間的腔隙逐漸匯成卵泡腔，腔內充滿卵泡液：成熟卵泡時，透明帶厚度最大，顆粒細胞具有踢顯的放射冠結構。2埋植M

6、LT銀黑狐超微結構可見原始卵泡卵母細胞胞質中分布有豐富的線粒體，可見大量不典型的高爾基復合體和或大或小深染的不均勻嗜鋨顆粒：初級卵泡階段線粒體數(shù)量增加，高爾基體數(shù)量減少，脂滴直徑變大，部分脂滴有1～3層滑面內質網圍繞，少量皮質顆粒出現(xiàn)，開始形成不完整的透明帶，且有短小的微絨毛斜伸入透明帶內：次級卵泡階段，內質網形成短的扁囊狀結構，皮質顆粒數(shù)量增多。三級卵泡多層顆粒細胞間隙融合成卵泡腔，透明帶內有長而多的微絨毛插入，偶爾可見到一個卵泡內有