蟲草真菌Fc-001產(chǎn)腺苷的研究.pdf

1、通過提取Fc-001菌株的基因組DNA，利用18S rRNA基因通用引物，進行擴增、轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌，將陽性克隆測序，獲得真菌Fc-001的18S rRNA基因序列，構(gòu)建進化樹，證實Fc-001菌株與冬蟲夏草Cordyceps sinensis有99％的同源性。 觀察不同培養(yǎng)條件下真菌Fc-001菌株菌絲體形態(tài)和培養(yǎng)外觀。固體培養(yǎng)條件下菌株Fc-001菌絲粗細均勻，細胞較小；氣生菌絲發(fā)達，培養(yǎng)基背面菌絲生長部位玫瑰紅色，培養(yǎng)7

2、天時可見到菌落表面有小水珠形成。液體培養(yǎng)條件48h時，菌絲細胞細長，培養(yǎng)72h后，可見少量的無性孢子：采用麥芽糖、蔗糖、淀粉、甘露醇葡萄糖和乳糖等不同碳源，在不同溫度培養(yǎng)條件下，液體搖瓶培養(yǎng)的菌絲呈現(xiàn)黃、紅兩種不同的顏色。 采用HPLC檢測發(fā)酵菌絲中腺苷含量，確定檢測條件：色譜柱Hypersil ODS反相柱，4.0mm×250mm，0.5μm，柱溫度25℃，檢測波長260nm，流動相0.01MKH2PO4：乙腈94:6。

3、 以真菌Fc-001菌絲體中腺苷含量和生物量為指標，進行液體搖瓶發(fā)酵，篩選最適的碳源、氮源，碳氮濃度、發(fā)酵周期、無機鹽、裝液量、接種量、pH值等，篩選最佳發(fā)酵條件。研究結(jié)果表明，最適搖瓶培養(yǎng)基組合為：早米粉4％，白糖1％，花生粉3％，生物素0.3％，KH2PO40.1％，MgSO40.05％，ZnSO4 10μg/L，pH 7.5，瓶裝量為250mL三角瓶裝量80mL，180rpm，24℃，培養(yǎng)時間8d。培養(yǎng)基組分優(yōu)化以后，腺苷產(chǎn)量由