葡萄皮提取物調(diào)節(jié)GRP78表達(dá)抑制脂褐素累積RPE細(xì)胞凋亡.pdf

1、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞處于光感受器外節(jié)和脈絡(luò)膜內(nèi)皮細(xì)胞之間。最為突出的功能是吞噬和消化老化脫落的外節(jié)膜盤(pán)，隨著年齡的增長(zhǎng)RPE細(xì)胞內(nèi)的脂褐素會(huì)逐漸積累，這也成為其衰老的標(biāo)志之一。在可見(jiàn)光或紫外線誘導(dǎo)下積累的脂褐素產(chǎn)生活性氧并引起 RPE細(xì)胞氧化應(yīng)激、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激以及未折疊蛋白反應(yīng)等，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，引發(fā)年齡相關(guān)性眼病。GRP78是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的蛋白分子伴侶，有輔助蛋白質(zhì)正確折疊的功能，同時(shí)參與到細(xì)胞凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑中。
　　本文的研究對(duì)象為紅

2、葡萄皮提取物。通過(guò)化學(xué)合成脂褐素主要熒光物質(zhì) A2E（N-亞視黃基-N-視黃基乙醇胺），建立 RPE細(xì)胞累積脂褐素模型。檢測(cè)藍(lán)光誘導(dǎo)A2E累積RPE細(xì)胞凋亡，進(jìn)而研究GSEs對(duì)凋亡的抑制作用。在此基礎(chǔ)上，研究了GSEs對(duì)A2E累積RPE細(xì)胞中GRP78及其下游凋亡信號(hào)分子CHOP表達(dá)的影響。此外，初步探討了GSEs對(duì)A2E累積RPE細(xì)胞中活性氧（ROS）的抑制作用。為GSEs作為一種膳食補(bǔ)充劑降低年齡相關(guān)性眼病風(fēng)險(xiǎn)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本課題

3、的主要研究結(jié)果如下：
　?。?）通過(guò)化學(xué)方法合成并純化獲得實(shí)驗(yàn)所需A2E，建立RPE細(xì)胞脂褐素積累模型。當(dāng)A2E處理濃度為25μM時(shí)，A2E積累量為141±7 ng/10^5個(gè)細(xì)胞與老年人眼組織RPE細(xì)胞中含量相近。激光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)A2E分散在細(xì)胞核周?chē)?，與人眼組織中RPE細(xì)胞生理狀態(tài)一致。
　?。?）MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力。低濃度A2E對(duì)RPE細(xì)胞活力沒(méi)有影響，25μM A2E處理RPE細(xì)胞經(jīng)藍(lán)光照射后培養(yǎng)12h抑制

4、率到達(dá)17.87±2.91％。GSEs能抑制藍(lán)光誘導(dǎo)A2E累積RPE細(xì)胞活性下降。
　?。?）流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡。25μM A2E處理RPE細(xì)胞后出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象，且呈現(xiàn)出時(shí)間效應(yīng)。GSEs能抑制藍(lán)光誘導(dǎo) A2E累積RPE細(xì)胞凋亡，濃度為5μg/mL時(shí)抑制作用最為顯著。
　?。?）機(jī)理研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，GSEs通過(guò)上調(diào)GRP78表達(dá)抑制藍(lán)光誘導(dǎo)A2E累積RPE細(xì)胞凋亡。同時(shí)，GSEs能抑制GRP78下游凋亡信號(hào)分子CHOP