槐米提取物槲皮素對(duì)人鼻咽癌CNE2細(xì)胞增殖和凋亡作用的研究.pdf

1、目的:研究桂北金槐槐米中的槲皮素對(duì)人鼻咽癌CNE2細(xì)胞增殖和凋亡作用的影響。觀察不同濃度槲皮素對(duì)人鼻咽癌CNE2細(xì)胞的增殖、凋亡、細(xì)胞周期以及對(duì)凋亡抑制因子Bcl-2蛋白的表達(dá)影響。探討槲皮素抗腫瘤作用機(jī)制為臨床應(yīng)用槲皮素抗鼻咽癌治療提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.采用臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測(cè)20,40,60,80μmol/L濃度的槐米中槲皮素對(duì)人鼻咽癌CNE2細(xì)胞24h,48h,72h的存活率。
　　2.在倒置顯微鏡下觀

2、察不同濃度藥物作用細(xì)胞后的形態(tài)學(xué)變化;同時(shí)采用hoechst33342熒光染色觀察不同濃度槲皮素作用于細(xì)胞48h后細(xì)胞凋亡形態(tài)變化。
　　3. FCM分析不同濃度槲皮素對(duì)人鼻咽癌CNE2細(xì)胞周期和凋亡的影響。
　　4.用Western blot分析不同濃度槲皮素對(duì)人鼻咽癌CNE2細(xì)胞Bcl-2蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1.從桂北金槐槐米中提取出的槲皮素對(duì)人鼻咽癌CNE2細(xì)胞具有明顯的生長(zhǎng)抑制作用,并呈時(shí)間和

3、劑量依賴性,即隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)和槲皮素濃度的增加腫瘤細(xì)胞的存活率越來(lái)越低。
　　2.在倒置顯微鏡下可以看到隨著藥物濃度的增加,細(xì)胞數(shù)量逐漸減少,細(xì)胞輪廓逐漸不清晰,可見(jiàn)毛刺狀,細(xì)胞體積可變小,胞質(zhì)分布不均,細(xì)胞碎片逐漸增多;20,40,60,80μmol/L濃度的槲皮素作用細(xì)胞48h后在熒光倒置顯微鏡下觀察隨著槲皮素濃度的增加凋亡小體越來(lái)越多,且越來(lái)越明顯,當(dāng)濃度達(dá)到60μmol/L時(shí),鏡下出現(xiàn)了大量不完整的細(xì)胞核和細(xì)胞碎片。<

4、br>　　3. FCM顯示經(jīng)不同濃度的槲皮素作用48h后細(xì)胞凋亡率隨藥物濃度增加而顯著增加,當(dāng)濃度達(dá)到40μmol/L以上時(shí),與對(duì)照組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。細(xì)胞周期阻滯在G1期,而S期的細(xì)胞數(shù)量逐漸增多。
　　4. Western blot結(jié)果顯示,隨著槲皮素濃度增加,Bcl-2蛋白的表達(dá)下調(diào)。槲皮素濃度在40μmol/L以上時(shí),與對(duì)照組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　結(jié)論:桂北金槐槐米中