槐米提取物槲皮素對人鼻咽癌CNE2細(xì)胞增殖和凋亡作用的研究.pdf

1、目的:研究桂北金槐槐米中的槲皮素對人鼻咽癌CNE2細(xì)胞增殖和凋亡作用的影響。觀察不同濃度槲皮素對人鼻咽癌CNE2細(xì)胞的增殖、凋亡、細(xì)胞周期以及對凋亡抑制因子Bcl-2蛋白的表達影響。探討槲皮素抗腫瘤作用機制為臨床應(yīng)用槲皮素抗鼻咽癌治療提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.采用臺盼藍拒染法檢測20,40,60,80μmol/L濃度的槐米中槲皮素對人鼻咽癌CNE2細(xì)胞24h,48h,72h的存活率。
　　2.在倒置顯微鏡下觀

2、察不同濃度藥物作用細(xì)胞后的形態(tài)學(xué)變化;同時采用hoechst33342熒光染色觀察不同濃度槲皮素作用于細(xì)胞48h后細(xì)胞凋亡形態(tài)變化。
　　3. FCM分析不同濃度槲皮素對人鼻咽癌CNE2細(xì)胞周期和凋亡的影響。
　　4.用Western blot分析不同濃度槲皮素對人鼻咽癌CNE2細(xì)胞Bcl-2蛋白表達情況。
　　結(jié)果:
　　1.從桂北金槐槐米中提取出的槲皮素對人鼻咽癌CNE2細(xì)胞具有明顯的生長抑制作用,并呈時間和

3、劑量依賴性,即隨著作用時間的延長和槲皮素濃度的增加腫瘤細(xì)胞的存活率越來越低。
　　2.在倒置顯微鏡下可以看到隨著藥物濃度的增加,細(xì)胞數(shù)量逐漸減少,細(xì)胞輪廓逐漸不清晰,可見毛刺狀,細(xì)胞體積可變小,胞質(zhì)分布不均,細(xì)胞碎片逐漸增多;20,40,60,80μmol/L濃度的槲皮素作用細(xì)胞48h后在熒光倒置顯微鏡下觀察隨著槲皮素濃度的增加凋亡小體越來越多,且越來越明顯,當(dāng)濃度達到60μmol/L時,鏡下出現(xiàn)了大量不完整的細(xì)胞核和細(xì)胞碎片。<

4、br>　　3. FCM顯示經(jīng)不同濃度的槲皮素作用48h后細(xì)胞凋亡率隨藥物濃度增加而顯著增加,當(dāng)濃度達到40μmol/L以上時,與對照組相比,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。細(xì)胞周期阻滯在G1期,而S期的細(xì)胞數(shù)量逐漸增多。
　　4. Western blot結(jié)果顯示,隨著槲皮素濃度增加,Bcl-2蛋白的表達下調(diào)。槲皮素濃度在40μmol/L以上時,與對照組相比,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
　　結(jié)論:桂北金槐槐米中