let-7b靶位點(diǎn)SNP調(diào)控Bcl-xL表達(dá)及對乳腺癌藥物敏感性的影響.pdf

1、目的：探討let-7b靶位點(diǎn)SNP(rs3208684 A＞C)調(diào)控Bcl-xL表達(dá)及對乳腺癌藥物敏感性的影響及其機(jī)制。
　　方法：利用 miRNA靶標(biāo)預(yù)測數(shù)據(jù)庫預(yù)測 Bcl-xL3′UTR中目前人類已知miRNA的結(jié)合靶點(diǎn)，結(jié)合 NCBI dbSNPs數(shù)據(jù)庫篩選出 Bcl-xL基因3′UTR SNP(rs3208684A＞C)為候選SNP。構(gòu)建野生型Bcl-xL真核表達(dá)載體(WT-Bcl-xL)和突變型Bcl-xL真核表達(dá)載體(

2、Mut-Bcl-xL)分別轉(zhuǎn)染乳腺癌MCF-7細(xì)胞。Western blot檢測蛋白表達(dá)情況。MTT檢測乳腺癌MCF-7細(xì)胞的藥物敏感性。雙熒光素酶報(bào)告基因檢測let-7b靶向調(diào)控Bcl-xL以及SNP(rs3208684 A＞C)對let-7b靶向Bcl-xL3′UTR的影響。
　　結(jié)果：let-7b mimics轉(zhuǎn)染乳腺癌MCF-7細(xì)胞后，Western blot結(jié)果顯示，與未轉(zhuǎn)染組和miRNA mimics control組

3、比較，let-7b mimics轉(zhuǎn)染組的Bcl-xL蛋白表達(dá)水平下調(diào)，而Bax蛋白表達(dá)水平不變；MTT結(jié)果顯示在相同濃度的5-FU或ADM組中，let-7b mimics轉(zhuǎn)染組比未轉(zhuǎn)染組和miRNA mimics control組對5-FU和ADM的敏感性增加。野生型或突變型 Bcl-xL真核表達(dá)載體分別轉(zhuǎn)染乳腺癌MCF-7細(xì)胞，MTT結(jié)果顯示Mut-Bcl-xL轉(zhuǎn)染組比WT-Bcl-xL轉(zhuǎn)染組對5-FU和ADM的敏感性降低；Weste

4、rn blot結(jié)果顯示，與WT-Bcl-xL轉(zhuǎn)染組相比， Mut-Bcl-xL轉(zhuǎn)染組的Bcl-xL蛋白表達(dá)水平和Bax蛋白表達(dá)水平并不改變。將野生型或突變型Bcl-xL真核表達(dá)載體分別與let-7b mimics共轉(zhuǎn)染乳腺癌MCF-7細(xì)胞后，Western blot結(jié)果顯示，和WT-Bcl-xL與let-7b mimics共轉(zhuǎn)染組相比， Mut-Bcl-xL與let-7b mimics共轉(zhuǎn)染組的Bcl-xL蛋白水平上調(diào)，Bax蛋白表達(dá)水

5、平?jīng)]有改變；MTT結(jié)果顯示Mut-Bcl-xL與let-7b mimics共轉(zhuǎn)染組比WT-Bcl-xL與let-7b mimics共轉(zhuǎn)染組對5-FU和ADM的敏感性降低。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果顯示， psiCHECK2-WT-Bcl-xL3′UTR與let-7b共轉(zhuǎn)染組比psiCHECK2-WT-Bcl-xL3′UTR與miRNA mimics control共轉(zhuǎn)染組及空白對照組的熒光素酶活性顯著降低；psiCHECK2-Mut-B

6、cl-xL3′UTR與let-7b共轉(zhuǎn)染組比psiCHECK2-Mut-Bcl-xL3′UTR與miRNA mimics control共轉(zhuǎn)染組及空白對照組的熒光素酶活性沒有變化；psiCHECK2-WT-Bcl-xL3′UTR與let-7b共轉(zhuǎn)染組比psiCHECK2-Mut-Bcl-xL3′UTR與let-7b共轉(zhuǎn)染組的熒光素酶活性顯著降低。結(jié)論：(1)let-7b通過調(diào)控Bcl-xL蛋白表達(dá)，增加乳腺癌MCF-7細(xì)胞對5-FU和A