Bcl-2-Bcl-XL siRNA對A549-DDP細(xì)胞順鉑敏感性的影響.pdf

1、目的：探討小干擾RNA 沉默Bcl-2、Bcl-XL 對肺腺癌耐藥細(xì)胞株A549/DDP順鉑敏感性的影響以及作用機制。 方法：將Bcl-2、Bcl-XL siRNA 質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染至A549/DDP細(xì)胞； MTT檢測細(xì)胞活性、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡情況；丫啶橙/溴化乙錠（AO/EB） 染色法檢測細(xì)胞自發(fā)凋亡；RT-PCR 檢測Bcl-2、Bcl-XL mRNA 水平，免疫熒光，Western-Blot 檢測Bcl-2、Bc

2、l-XL、caspase-3、PARP 蛋白表達(dá)的變化。 結(jié)果：分別用0.2、2、20、200 μg /ml 順鉑處理細(xì)胞48 小時，MTT 顯示轉(zhuǎn)染Bcl-2 siRNA、Bcl-XL siRNA 細(xì)胞組A570 吸光度值較陰性siRNA 細(xì)胞組和未轉(zhuǎn)染對照組明顯降低，相應(yīng)的細(xì)胞生長抑制率分別為：13.31±1.23％、12.65±1.70％ vs. 2.18±0.65％ vs. 2.16±0.80％ ；16.52±1.02％

3、、15.13±1.14％ vs. 3.05±1.05％ vs. 2.85±0.76％；46.19±0.89％、49.24±0.48％vs. 28.15±0.65％ vs. 27.26±0.85％；54.51±1.02％、58.75±0.45％ vs. 31.18±0.79％ vs. 33.27±1.23％，細(xì)胞生長抑制率明顯增高，DDP 藥物的IC50 值在Bcl-2 siRNA、Bcl-XL siRNA 細(xì)胞組有明顯降低；用20 μg

4、 /ml 順鉑處理細(xì)胞48 小時，流式細(xì)胞儀檢測，轉(zhuǎn)染Bcl-2siRNA、Bcl-XL siRNA 組凋亡率較轉(zhuǎn)染陰性siRNA 組和未轉(zhuǎn)染組增加，其凋亡率分別為：11.1±0.52％、20±0.48％ vs. 1.8±0.35％ vs. 2.4±0.57％；AO/EB 染色顯示轉(zhuǎn)染Bcl-2 siRNA、Bcl-XL siRNA 的細(xì)胞較轉(zhuǎn)染陰性siRNA 及未轉(zhuǎn)染者凋亡率增加；轉(zhuǎn)染Bcl-2siRNA、Bcl-XL siRNA 降