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文檔簡介
1、對牛傳染性鼻氣管炎(IBR)的診斷,現(xiàn)有的國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定為血清中和試驗(yàn),由于該試驗(yàn)操作復(fù)雜,費(fèi)時長、成本高,基層獸醫(yī)難以采用。為了解決IBR的快速診斷問題,本研究試圖采用PCR方法對牛傳染性鼻氣管炎進(jìn)行快速的病原學(xué)診斷,研制間接ELISA試劑盒對牛傳染性鼻氣管炎進(jìn)行快速血清學(xué)診斷。
根據(jù)已發(fā)表的牛傳染性鼻氣管炎病毒gB基因序列,合成了兩條引物,優(yōu)化了反應(yīng)條件,分別對IBRV的Bartha Nu/67株,IBRV-BK125株
2、DNA模板進(jìn)行擴(kuò)增,結(jié)果對兩株IBR病毒DNA均可擴(kuò)增出362bp的特異性片段；對偽狂犬病毒(PRV)、火雞皰疹病毒(HVT)及牛病毒性腹瀉-粘膜病病毒(BVDV)進(jìn)行擴(kuò)增均未見特異性條帶。靈敏性檢測表明,該P(yáng)CR方法對IBR病毒的檢出限量為711TCID50。
以IBR山羊腎細(xì)胞病毒液作為包被抗原,建立了檢測IBRV血清抗體的間接ELISA方法,并確定了抗原包被稀釋度、血清稀釋度、鼠抗牛IgG單抗稀釋度、血清作用時間、封
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