牛傳染性鼻氣管炎病毒內(nèi)蒙古分離株.pdf

1、本試驗參考牛皰疹病毒I型全基因序列NC001847(GenBank)分別設(shè)計5對特異性引物，以牛傳染性鼻氣管炎病毒內(nèi)蒙古分離株。NM06株提取的總DNA為模板，運用PCR的方法分別擴(kuò)增5個基因的cDNA，將獲得的cDNA連接到PMD19-T質(zhì)粒載體中，并進(jìn)行克隆，經(jīng)PCR鑒定后的陽性重組質(zhì)粒送寶生物工程(大連)有限公司進(jìn)行測序。結(jié)果表明，內(nèi)蒙古分離株NM06的gE基因長2086bp，包含1個1728bp的完整開放閱讀框，編碼576個氨基

2、酸；gI基因長1280bp，包含1個1149bp的完整開放閱讀框，編碼383個氨基酸；gG基因長1599bp，包含1個1335bp的完整開放閱讀框，編碼445個氨基酸；gN基因長為1459bp，包含2個完整開放閱讀框，第1個由291bp組成的完整開放閱讀框，編碼的是gN基因，編碼區(qū)共編碼97個氨基酸：第2個由777bp組成的完整開放閱讀框，編碼的是VP22基因，編碼區(qū)共編碼259個氨基酸。
　　 將NM06株gE、gI、gG、g

3、N及VP22基因序列分別與參考毒株相應(yīng)的基因序列進(jìn)行同源性比較結(jié)果發(fā)現(xiàn)，NM06gE基因與其它毒株的核苷酸同源性在93.4％～99.9％，推導(dǎo)氨基酸同源性在83．8％～99．8％NM06gI基因與其它毒株的核苷酸同源性在96．2％～99．8％，推導(dǎo)氨基酸同源性在89．2％～99.5％；NM06 gG基因與其它毒株的核苷酸同源性在97.4％～99．8％，推導(dǎo)氨基酸同源性在95．9％～99．5％；NM06gN基因與其它毒株的核苷酸同源性均為

4、99.3％，推導(dǎo)的氨基酸同源性均為97.9％；NM06 VP22基因與其它毒株的核苷酸同源性均為100％，推導(dǎo)氨基酸同源性在99．6％～100％。NM06株5個基因的基因序列與BHV-5各毒株相應(yīng)的基因序列核苷酸同源性在71.7％～82.9％，推導(dǎo)氨基酸同源性在69.5％～82．6％。構(gòu)建的遺傳進(jìn)化樹分析結(jié)果顯示，NM06株與分離自瑞典的can kao株和cooper株位于1個進(jìn)化分支，與BHV-5和CvHV-2不在1個進(jìn)化分支上，以上