Src-家族酪氨酸激酶在炎性因子誘導(dǎo)的人晶狀體上皮細胞生物學(xué)行為變化中的作用.pdf

1、研究背景：
　　白內(nèi)障摘除聯(lián)合人工晶狀體植入術(shù)后有約20％的病人發(fā)生晶狀體后囊膜混濁即后發(fā)性白內(nèi)障（PCO）。術(shù)后殘余的晶狀體上皮細胞增殖，遷移和纖維化生是PCO形成的主要原因。術(shù)后房水屏障的破壞以及大量炎細胞和炎性因子進入前房參與了PCO的形成，有研究表明IL-1，IL-6和TNF-α參與了PCO形成的部分細胞生物學(xué)行為改變。Walker等在體外培養(yǎng)的雞胚晶狀體囊膜PCO模型中發(fā)現(xiàn)抑制Src-家族酪氨酸激酶（SFKs）活性可抑制

2、晶狀體上皮細胞（LECs）從前囊膜向后囊移行，從而抑制PCO的發(fā)生。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)SFKs的特異性抑制劑PP1能阻止晶狀體上皮細胞的凋亡、加強上皮細胞與晶狀體纖維的連接、保持晶狀體上皮細胞的極性，有利于晶狀體上皮細胞在外界刺激的影響下保持其正常的上皮細胞功能從而保持晶狀體的透明。基于以上研究結(jié)果，我們推測SFKs參與了炎性因子誘導(dǎo)的人晶狀體上皮細胞生物學(xué)行為改變，本研究將利用炎性因子刺激體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細胞，研究Src的激活參

3、與PCO形成的細胞機制。
　　目的：
　　探討Src-家族酪氨酸激酶異常激活在炎性因子誘導(dǎo)的晶狀體上皮細胞行為改變中的作用。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細胞 HLE B-3，當(dāng)細胞達到刺激要求后加入含0.5%胎牛血清的培養(yǎng)液作為空白對照組，處理組分別加入10 ng/ml的IL-1a、IL-1β、IL-6、TNF-α和這四種炎性因子的混合物，PP1干預(yù)組是在加入各炎性因子之前用10μΜPP1預(yù)孵育細胞，3

4、0 min后吸棄含PP1的培養(yǎng)液，再加入含相應(yīng)炎性因子的培養(yǎng)液。用細胞活力檢測實驗和細胞計數(shù)法檢測LECs的增殖變化，細胞劃痕實驗和Transwell實驗檢測LECs遷移能力的變化，細胞免疫熒光染色和Western-blotting實驗分別定性檢測和半定量分析LECs增殖核抗原 PCNA，上皮細胞向間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)分化（EMT）的標(biāo)志分子α-SMA、FN、CollagenⅣ和ZO-1的變化，以及Src活性、MMP-9的表達變化。
　　

5、結(jié)果：
　　1) IL-1α，IL-1β，IL-6和TNF-α刺激晶狀體上皮細胞Src異常激活，Src-家族酪氨酸激酶特異性抑制劑PP1能抑制這種變化。
　　2）IL-1α，IL-1β，IL-6，TNF-α和四種炎性因子混合物使晶狀體上皮細胞活力增加，促進細胞增殖。PP1能有效抑制這種變化，抑制細胞增殖。
　　3）IL-1β，TNF-α和四種炎性因子混合物促進晶狀體上皮細胞移行，PP1能有效抑制這些炎性因子誘導(dǎo)的晶狀體

6、上皮細胞移行。
　　4）IL-1β和TNF-α促進晶狀體上皮細胞MMP-9高表達，PP1抑制這些炎性因子誘導(dǎo)的MMP-9的表達。
　　5）IL-1β和TNF-α使晶狀體上皮細胞α-SMA，F(xiàn)N，CollagenⅣ高表達，降低ZO-1的表達，促進晶狀體上皮細胞轉(zhuǎn)分化。PP1能阻止IL-1β和TNF-α誘導(dǎo)的晶狀體上皮細胞轉(zhuǎn)分化。
　　結(jié)論：
　　Src-家族酪氨酸激酶的異常激活參與炎性因子 IL-1α，IL-1β，