腦神經生長因子鞘注緩釋納米粒研制及治療馬尾神經綜合征的效果研究.pdf

1、本文以乳酸-羥基乙酸共聚物為載體,研究制備了可供硬脊膜鞘內注射用的腦神經生長因子緩釋納米制劑,并對它的理化特征,體內外釋藥行為及藥效學進行了較為深入的探討,同時建立了馬尾神經損傷模型,進一步對外源性的鞘注腦神經生長因子緩釋納米粒對犬馬尾神經損傷的修復作用進行了研究。 在納米粒制備方法的研究中,采用了復乳(w/o/w)法的制備方法,以納米粒形態(tài)、粒徑及其分布、納米粒載藥量、藥物包封率、納米粒收率及納米粒的體外釋放等作為含藥納米粒的

2、質量評價指標,對結果進行了二因素的星點設計,以判斷各種因素對實驗結果的影響；在此基礎上,根據三維效應面圖,選擇突釋小且累積釋放多的值,綜合考慮,優(yōu)選處方并制備出各項指標性質優(yōu)良的納米粒制劑。 光學顯微鏡和掃描電鏡觀察納米粒狀態(tài)、外觀形態(tài)、表面狀態(tài)和內部結構。納米粒呈規(guī)則球形,分散性和流動性均較好,表面光滑,不粘連,內部為實心結構。差示掃描量熱法和X-射線衍射分析結果表明腦神經生長因子被有效地包埋在PLGA納米粒中,分散在聚合物骨

3、架中,具有良好的緩釋納米粒的結構特征。用氣相色譜法測定納米粒中二氯甲烷殘留量,測定結果為43.43±1.48ppm,符合規(guī)定要求。 腦神經生長因子緩釋納米粒體內外釋放特性研究中,以pH7.4磷酸鹽緩沖液(PBS)為釋放介質,測定納米粒釋放速率,結果表明,納米粒體外釋藥行為符合Higuchi方程。通過鞘注將納米粒注射入犬背脊馬尾神經區(qū)域,預定時間測定腦脊液內腦神經生長因子活性含量,考察腦神經生長因子緩釋納米粒體內釋放速率。結果表明

4、,納米粒體內釋藥行為符合Higuchi方程。以納米粒在pH7.4磷酸鹽緩沖液中(X)和體內(Y)釋放量數據按時間配對,進行線性回歸,得回歸方程：Y=1.0225X+5.9701,r=0.9872,兩者相關性極顯著(a=0.01),納米粒體內外釋藥行為具有良好相關性。通過多重馬尾束縊(Multiple cauda equina constrictions,MCEC)模型并最終導致馬尾綜合征(Cauda equina syndrome,CE

5、S)的實驗研究,建立馬尾神經損傷模型。應用腦神經生長因子緩釋納米粒,通過形態(tài)學、組織學觀察,電鏡染色掃描,神經功能評價,組織學半定量評分,骶神經功能綜合測定,性功能勃起綜合測定,并采用免疫組化方法對體內的BDNF表達情況進行檢測,考察腦神經生長因子緩釋納米粒的體內神經修復作用。結果顯示,腦神經生長因子緩釋納米粒能夠有效修復體內馬尾神經組織。 使用顯微鏡觀察組織切片法,考察納米粒體內生物相容性。在1～28天時間內,空白納米粒與腦神