MUC1核酸適配體的篩選及其在腫瘤靶向治療方面的初步應用研究.pdf

1、目的：化療是治療惡性腫瘤最主要的手段之一，但化療藥物較強的毒副作用往往限制了其治療效果的充分發(fā)揮。靶向藥物治療系統(tǒng)有可能改善化療的療效，因其可以選擇性的將藥物遞送到腫瘤細胞，提高藥物在腫瘤部位的濃度，從而促進藥物對腫瘤細胞的殺傷作用，同時降低對正常細胞和組織的損傷。MUC1蛋白是一種廣泛表達在多種腫瘤細胞膜上的糖蛋白，在大多數(shù)腺癌（乳腺癌、肺癌、結(jié)腸癌等）中有過量表達，是一個較為理想的廣譜的腫瘤靶標分子。核酸適配體(aptamer)是一

2、類短的單鏈核苷酸分子，能以較強的特異性和較高的親和力和靶標分子結(jié)合。核酸適配體有其獨特的優(yōu)點，包括易于合成、價格便宜、易于修飾、免疫原性低、易于穿透腫瘤組織等，因而是一種較為理想的靶向分子。在本研究中，我們篩選了一種全新的MUC1核酸適配體，并在體外評估了該適配體是否可以作為靶向分子選擇性地將阿霉素帶入MUC1陽性的腫瘤細胞。
　　 方法：我們選取MUC1蛋白中具有較高免疫原性的肽段作為靶標，用指數(shù)級富集的配體進化技術(shù)(SELE

3、X)篩選了一種與該肽段具有較高結(jié)合力的aptamer(MA3)；以流式細胞儀檢測了MA3和白蛋白、MUC1陽性的腫瘤細胞(MCF7和A549)似及MUC1陰性的細胞（HepG2和L02）的結(jié)合情況；將阿霉素嵌入MA3的DNA結(jié)構(gòu)構(gòu)建了適配體和阿霉素(Apt-Dox)的復合體，并通過阿霉素的熒光光譜分析了Apt-Dox復合體的構(gòu)建情況；以共聚焦顯微鏡和流式細胞儀評估了MUC1陽性腫瘤細胞A549和MUC1陰性細胞HepG2對Apt-Dox

4、復合體的攝?。灰訫TS法檢測了Apt-Dox復合體對MUC1陽性腫瘤細胞A549和MUC1陰性細胞HepG2的殺傷作用。
　　 結(jié)果：(1)我們所篩選到的MUC1適配體MA3的長度為86個堿基。該適配體與MUC1多肽的親和系數(shù)為38.3nM，和白蛋白的交叉結(jié)合相對較弱。(2)該適配體能夠識別MUC1陽性的腫瘤細胞MCF7和A549，但基本不結(jié)合MUC1陰性的細胞HepG2和L02。(3)通過將阿霉素嵌入MA3的DNA結(jié)構(gòu)，我們構(gòu)

5、建了適配體和阿霉素(Apt-Dox)的復合體。在體外實驗中，該復合體能夠攜帶阿霉素進入MUC1陽性的腫瘤細胞，并降低藥物在MUC1陰性腫瘤細胞中的攝取。(4)Apt-Dox復合體保持了阿霉素對MUC1陽性的腫瘤細胞的殺傷作用，但顯著減弱了對MUC1陰性腫瘤細胞的殺傷(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：本研究篩選出了一種全新的MUC1適配體MA3，能夠識別腫瘤細胞上的MUC1結(jié)構(gòu)?；谠撨m配體所構(gòu)建的Apt-Dox復合體，在體外試驗中