生物材料對神經(jīng)類細胞培養(yǎng)和生長分化的影響.pdf

1、組織工程是應用工程學和生命科學原理，研究和開發(fā)能夠修復和改善損傷組織結構與功能的生物替代物的一門學科。它已經(jīng)成為當今最熱點的研究之一，而生物材料作為組織工程學重要要素之一，已經(jīng)越來越受到重視。本論文對兩種生物材料聚乳酸羥基乙酸(PLGA)和聚乙二醇(PEG)水凝膠分別表面加工處理，研究其對神經(jīng)類細胞的培養(yǎng)和分化生成神經(jīng)細胞的影響，主要包括PLGA對神經(jīng)元細胞生長的影響，對PC12細胞生長及分化為神經(jīng)細胞的影響;PEG水凝膠對誘導多功能干

2、細胞(IPS)分化生成神經(jīng)細胞的影響。為神經(jīng)組織工程的臨床應用提供基礎。本論文所做的工作有:
　　(1)分離昆明白小鼠的神經(jīng)原代細胞，培養(yǎng)并純化，為生物材料表面對細胞黏附生長實驗提供細胞源并作對照組。通過甲苯胺藍染色和免疫熒光抗體染色實驗，證明成功分離出昆明白小鼠的神經(jīng)元細胞。
　　(2)分離原代小鼠胚胎成纖維細胞，并成功對細胞進行培養(yǎng)，傳代，凍存及復蘇，通過絲裂霉素處理后，為誘導多功能干細胞(IPS)培養(yǎng)做滋養(yǎng)層。結果表明

3、在滋養(yǎng)層上可以良好的培養(yǎng)IPS細胞，多次傳代，凍存，復蘇后仍具有良好的細胞形態(tài)。
　　(3)以PLGA顆粒為基材，探究了PLGA薄膜的制備技術，制備了PLGA薄膜，堿處理后通過衰減全反射傅立葉轉換紅外(ATR-FTIR)波譜掃描測定其表面有羧基，然后采用碳化二亞胺(EDC-NHS)兩步接枝法將多聚賴氨酸和不同濃度的神經(jīng)生長因子(NGF)固定化到PLGA薄膜上，再分別用神經(jīng)原代細胞和神經(jīng)嗜鉻細胞瘤(PC12)細胞株在處理后的PLGA

4、薄膜上分別進行培養(yǎng)和誘導。通過羅丹明B對接枝蛋白前后的PLGA薄膜的標記處理，輔助于熒光染色照片和MTT法檢測，對薄膜表面細胞的粘附情況和分化情況進行直觀的描述。結果證明多聚賴氨酸和NGF因子都固定化到了PLGA薄膜上，并對原代細胞的培養(yǎng)和PC12細胞的誘導具有積極的作用。
　　(4)使用分子量為2000的分子兩端有雙鍵的PEG大單體聚乙二醇雙丙烯酸酯(PEGDA)為原料，通過紫外光聚合技術制備出的PEG水凝膠薄膜，根據(jù)實驗要求設

5、計制備了轉移試劑ACRL-PEG2000-RGDS，并利用此轉移試劑和二次光聚合技術把黏附因子多肽RGDS接枝到PEG水凝膠薄膜上，使改性后的PEG水凝膠薄膜具有細胞黏附能力。通過MTT數(shù)據(jù)檢測了改性后PEG水凝膠薄膜對PC12細胞的活性的影響。
　　(5)制備分子量為2000的PEG水凝膠，二次光聚合把RGDS和NGF接枝到PEG水凝膠薄膜上，通過對IPS細胞的誘導培養(yǎng)，特異性鑒定后證明在PEG水凝膠上接枝誘導因了使IPS細胞向