過度訓(xùn)練大鼠腎組織IL-6、IL-18、凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原的表達(dá)及山莨菪堿干預(yù)的影響.pdf

1、目的：過度訓(xùn)練可以引起機(jī)體組織器官的損傷，如何防治運(yùn)動引起的臟器損傷是目前運(yùn)動醫(yī)學(xué)、軍事醫(yī)學(xué)及臨床醫(yī)學(xué)關(guān)注的課題。本研究采用大鼠游泳至力竭的方法，建立過度訓(xùn)練致急性腎損傷(over-training induced acute kidneyinjury，OTIAKI)動物模型，研究大鼠力竭后不同時間腎組織中IL-6、IL-18、凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原(FⅧRAg)表達(dá)的變化，觀察山莨菪堿對上述指標(biāo)的影響，旨在加深對OTIAKI發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識

2、，為臨床OTIAKI的防治提供新的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：1.分組雄性健康Wistar大鼠36只，體重200～220g，隨機(jī)分為6組：安靜對照組(CN組，平時不運(yùn)動)；力竭運(yùn)動后即刻組(ESI組，力竭運(yùn)動后即刻采集標(biāo)本)；力竭運(yùn)動后6小時組(ES 6h組，力竭運(yùn)動后6小時采集標(biāo)本)；力竭運(yùn)動后24小時組(ES 24h組，力竭運(yùn)動后24小時采集標(biāo)本)；山莨菪堿6小時組(AD 6h組，游泳前20min于腹腔內(nèi)注射山莨菪堿(10mg/

3、kg)，力竭運(yùn)動后6小時采集標(biāo)本)；山莨菪堿24小時組(AD 24h組，游泳前20min于腹腔內(nèi)注射山莨菪堿(10mg/kg)，力竭運(yùn)動后24小時采集標(biāo)本)。2.建立動物模型采用大鼠游泳至力竭法建立OTIAKI動物模型，各實(shí)驗(yàn)組大鼠于實(shí)驗(yàn)第一天適應(yīng)性游泳30min，第二天放于水中，無負(fù)重游泳至力竭。力竭的標(biāo)準(zhǔn)為：①沉入水底超過10秒②游泳動作明顯不協(xié)調(diào)；③撈出后沒有逃避反應(yīng)，且放在平面無法完成翻正反射(個別大鼠有假死的現(xiàn)象，要注意判斷)

4、。3.取材各組大鼠于相應(yīng)的時間點(diǎn)用乙醚麻醉，麻醉理想后于腹部正中切開，取左腎置入4℃4％多聚甲醛中固定，備行石蠟切片；取右腎置于液氮中封存，備行IL-6、IL-18的酶聯(lián)免疫(ELISA)法檢測。4.觀察指標(biāo)常規(guī)制作石蠟切片，采用HE染色光鏡下觀察腎組織形態(tài)學(xué)變化：用ELISA法檢測大鼠力竭后不同時間點(diǎn)的腎組織勻漿中IL-6、IL-18的含量；應(yīng)用免疫組織化學(xué)(PV)法檢測FⅧRAg在腎組織中的表達(dá)；應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)對免疫組織化學(xué)結(jié)果進(jìn)

5、行半定量分析。5.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示，用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，組間差異用one-way ANOVA(單因素方差分析)，有顯著差異者用Student-Newmalq-Keuls test(q檢驗(yàn))進(jìn)行兩兩比較，P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：1.安靜對照組大鼠腎組織中IL-6少量表達(dá)，力竭運(yùn)動后即刻組增高(P＜0.05)；力竭運(yùn)動后6小時組、力竭運(yùn)動24小時組與安靜對照組

6、相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，山莨菪堿組與單純力竭組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。2.安靜對照組大鼠腎組織中IL-18少量表達(dá)，力竭運(yùn)動后即刻組顯著增高(P＜0.01)，力竭運(yùn)動后6小時組繼續(xù)增高(P＜0.05)，力竭運(yùn)動后24小時組有所下降但仍高于對照組(P＜0.05)。與單純力竭組比較山莨菪堿組大鼠腎組織中IL-18水平明顯減低(P＜0.05)。3.免疫組化結(jié)果顯示，F(xiàn)ⅧRAg在安靜對照組大鼠腎組織中有輕度表達(dá)，

7、光鏡下可見小管周圍有散在的棕紅色短線形物質(zhì)，判定為毛細(xì)血管，力竭運(yùn)動后即刻組無明顯變化。力竭運(yùn)動后6小時組、力竭運(yùn)動后24小時組棕紅色物質(zhì)增多，山莨菪堿組棕紅色物質(zhì)增多并可見棕紅色橢圓形套索，考慮為開放的毛細(xì)血管。圖像分析統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，力竭運(yùn)動后即刻組與安靜對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，力竭運(yùn)動后6小時組增多(P＜0.05)，力竭運(yùn)動后24小時組達(dá)到高峰(P＜0.05)。與單純力竭組比較山莨菪堿組大鼠腎組織中FⅧRAg水平

8、顯著增多(P＜0.05)。 結(jié)論：1.力竭后即刻大鼠腎組織IL-6、IL-18表達(dá)增高，力竭后6小時IL-6表達(dá)恢復(fù)，而IL-18表達(dá)增高更加明顯，力竭后24小時IL-8的表達(dá)也有所恢復(fù)，說明炎癥反應(yīng)在過度訓(xùn)練致大鼠腎損傷早期發(fā)揮重要作用。2.力竭后6小時大鼠腎組織FⅧRAg表達(dá)增高，24小時達(dá)到高峰，提示力竭運(yùn)動后腎臟能通過增加毛細(xì)血管密度來恢復(fù)血供，這可能是細(xì)胞沒有發(fā)生壞死而走向凋亡的重要機(jī)制之一。3.山莨菪堿能降低OTIA