過度訓練致急性腎損傷大鼠腎組織NOD2及IL-6表達以及山莨菪堿干預作用的研究.pdf

1、目的:過度訓練可導致急性腎損傷，嚴重者可危及生命，因此探討其發(fā)病機制和防治措施具有重要的臨床意義。本課題組以往的研究表明，炎癥反應參與了過度訓練致急性腎損傷(overtraining-induced acute kidneyinjury, OTIAKI)的發(fā)生和發(fā)展，山莨菪堿能夠減輕過度訓練造成的急性腎損傷，但其確切機制尚不完全清楚。研究表明，核苷酸結合寡聚化結構域蛋白2(nucleotide-binding oligomerizati

2、on-2，NOD2)、促炎因子白介素-6(interleukin-6，IL-6)在炎癥反應性疾病過程中發(fā)揮重要作用，參與了腎缺血再灌注損傷時的炎癥反應過程，但它們在過度訓練致急性腎損傷中的作用尚未見文獻報道。本研究擬通過大鼠游泳至力竭建立過度訓練致急性腎損傷模型，研究OTIAKI時腎組織細胞中NOD2和IL-6的表達情況，探討NOD2及IL-6在急性腎損傷中的作用機制，觀察山莨菪堿對OTIAKI大鼠腎組織NOD2和IL-6表達的影響，為

3、過度訓練致急性腎損傷的防治靶點及新藥的設計提供思路。
　　方法:
　　1.清潔級健康雄性SD大鼠36只，體重180～200g，隨機分為3組:正常對照組(CN，n=6)，力竭組(ES，n=18)和山莨菪堿組(AD，n=12)。按力竭后即刻、6h和24h，ES組又分為ESI組、ES6h組和ES24h組3個亞組(n=6）;AD組又分AD6h組和AD24h組2個亞組(n=6）。CN組不進行力竭運動;ES組和AD組于力竭前20 min

4、分別腹腔注射滅菌注射用水2ml/kg和山莨菪堿注射液10 mg/kg。
　　2.采用大鼠單次無負重游泳至力竭法建立過度訓練致急性腎損傷動物模型。實驗在安靜環(huán)境中進行。采用自制玻璃鋼游泳池(150cm×60cm×80cm)，水深70cm左右，水溫保持在30±2℃.為保證大鼠有足夠的游泳空間及避免觀察不及時大鼠發(fā)生溺水，每次各組取1只大鼠游泳。
　　3.腹腔注射10％水合氯醛(0.6ml/kg)麻醉，腹部消毒后沿腹正中切開，下腔

5、靜脈取血，采用AU2700全自動生化儀測定血清肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)水平;在冰上摘取雙腎，右腎置于4℃4％多聚甲醛中固定，用于HE染色觀察腎組織病理變化，免疫組化法檢測腎組織NOD2的表達及分布;左腎迅速放于凍存管中，置于-80℃冰箱保存，待westernblotting法測定腎組織NOD2的表達和ELISA法測定腎組織IL-6的表達。(4)統(tǒng)計學處理:采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學分析，正態(tài)分布的定量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差((

6、x)±s)表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用Student-Newman-Kuels檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果:
　　1.一般情況:CN組大鼠反應靈敏，活動自如，正常進食、水。ES組大鼠反應遲鈍，精神萎靡，呼吸急促，站立不穩(wěn)，全身肌肉顫抖，運動失協(xié)調，球結膜充血，飲水和進食量明顯減少。AD組一般情況較同期ES組好。
　　2.腎組織病理變化:CN組大鼠腎組織未見明顯病理變化;ESI組可見

7、腎小管上皮細胞輕度水腫; ES6h組可見有少部分的腎小球球囊擴張，腎小管管腔輕度擴張，腎小管上皮細胞水腫，有空泡狀變性，局部充血，部分刷狀緣可見不規(guī)整，局部有脫落，炎癥細胞浸潤明顯;ES24h組腎小管管腔明顯擴張，刷狀緣不規(guī)整、有脫落，上皮細胞重度水腫，局部充血。與同期ES組比較，AD組腎組織病理改變明顯減輕;
　　3.與CN組比較，ESI組和ES6h組血清Cr、BUN升高，其中ES6h組達高峰(P＜0.05）;與同期ES組比較，

8、AD6h組血清Cr、BUN降低，但仍高于CN組水平(P＜0.05);
　　4.ELISA檢測結果顯示: ESI組及ES6h組與CN組比較，腎組織IL-6表達上調，ES6h組達高峰(P＜0.05），ES24h組恢復至CN組水平;AD6h組與ES6h組比較，腎組織IL-6表達下調(P＜0.05）;
　　5.免疫組織化學檢測結果示NOD2陽性表達主要分布在近端小管上皮細胞胞漿內，腎小球及腎間質未見明顯表達。半定量分析及wester

9、n blotting結果示:ESI組及ES6h組與CN組比較，腎組織NOD2表達上調，ES6h組表達最高（P＜0.05）;與ES同期亞組比較，AD組腎組織NOD2表達下調(P＜0.05)。
　　結論:
　　1.過度訓練致大鼠急性腎損傷時，腎組織NOD2和IL-6表達上調，提示炎癥反應在OTIAKI中發(fā)揮重要作用。
　　2.山莨菪堿可部分逆轉OTIAKI時腎組織NOD2和IL-6表達的上調，減輕了過度訓練引起的急性腎損傷