MicroRNA-125b在肝癌中的功能和機制研究.pdf

1、MicroRNAs（miRNAs）是一類長度約為20-24個核苷酸的小的非編碼RNA分子，廣泛存在于自然界多種生物基因組內(nèi)，具有序列特異性調(diào)節(jié)基因表達的重要功能，主要是在轉(zhuǎn)錄后水平發(fā)揮其調(diào)控基因表達的作用，通過抑制生物體內(nèi)蛋白質(zhì)的翻譯或者引起mRNA的降解，是轉(zhuǎn)錄后水平進行基因表達調(diào)控的重要分子之一。研究發(fā)現(xiàn)，miRNA在生物體生長發(fā)育、細胞增殖、分化、凋亡及人類重大疾病的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。miRNA表達失控與腫瘤的發(fā)

2、生密切相關(guān)，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中可起到腫瘤基因或腫瘤抑制基因的作用。因此，研究腫瘤發(fā)生過程中相關(guān)miRNA的表達及功能已經(jīng)成為當今腫瘤發(fā)生機制研究的熱點之一，具有重要的理論和實際意義。
　　肝細胞性肝癌（HCC）是嚴重危害人類健康的惡性腫瘤之一，死亡率高，且其發(fā)生機制復雜，目前尚不十分明確。miRNA作為一種非編碼RNA基因，在HCC中常見失控表達。我們用NorthernBlot方法，初步分析了多個潛在抑癌miRNAs在HCC組

3、織及相關(guān)肝癌細胞系中的表達，結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)，定位于人11號染色體的miR-125b，在HCC組織及肝癌細胞系中表達明顯下調(diào)。
　　NorthernBlot表達分析顯示，與癌旁組織相比，miR-125b在6對HCC組織和HepG2、SMMC7721及Huh7等肝癌細胞系中表達明顯下調(diào)。隨后擴大樣本使用實時熒光定量PCR檢測32對肝癌組織及相應的癌旁組織中miR-125b的表達情況，結(jié)果顯示其在腫瘤組織中的表達明顯低于癌旁組織。因此，我

4、們推測miR-125b可能作為抑癌miRNA，在HCC發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮作用。為研究miR-125b的功能，我們使用miR-125bmimic轉(zhuǎn)染HepG2細胞使其過表達，結(jié)果顯示，miR-125b過表達后，肝癌細胞增殖減緩和細胞周期阻滯。我們利用生物信息學及分子生物學方法，對其靶基因進行了初步鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Mcl-1和IL6R是其調(diào)控的兩個重要的靶基因，它們在HCC中都是高表達的。我們推測miR-125b可能通過靶向抑制Mcl-1和I

5、L6R的表達而發(fā)揮抑癌基因的功能，阻礙肝癌細胞增殖和細胞周期循環(huán)。
　　為了驗證這個設想，我們設計“拯救”實驗（RescuedAssay）對此加以分析。將Mcl-1和IL6R表達載體導入外源過表達miR-125b的HepG2細胞中，我們發(fā)現(xiàn)，Mcl-1和IL6R表達恢復的同時，S期細胞也隨之增加，這說明miR-125b就是通過靶向抑制Mcl-1和IL6R的表達，從而參與HCC細胞增殖和細胞周期調(diào)控。
　　綜上所述，miR-1