酒精對大鼠結(jié)腸內(nèi)iNOS表達(dá)的上調(diào)作用及其機制研究.pdf

1、目的：核因子κB（nuclear factor—κB，NF—κB）作為轉(zhuǎn)錄因子，廣泛參與腫瘤、炎癥及免疫性疾病的發(fā)病過程，參與機體防御反應(yīng)、組織損傷和應(yīng)激、細(xì)胞分化和細(xì)胞凋亡以及腫瘤生長抑制等過程的信息轉(zhuǎn)導(dǎo)。NF—κB包括NF—κB1、NF—κB2和某些癌基因蛋白（如RelA）等，通常與其抑制蛋白ⅠκB結(jié)合，以二聚體的形式存在于胞漿中，當(dāng)細(xì)胞受到外界刺激時，如病毒或細(xì)菌感染、紫外線照射、氧化應(yīng)激等，ⅠκB被迅速磷酸化，釋放NF—κB使之

2、轉(zhuǎn)入胞核內(nèi)，結(jié)合于特定的κB序列，啟動和調(diào)節(jié)眾多與免疫、炎癥反應(yīng)有關(guān)的基因轉(zhuǎn)錄。酒精可能通過激活NF—κB、提高iNOS表達(dá)而引起了NO釋放。本研究主要是對該假設(shè)進(jìn)行驗證。 方法：實驗選用健康雄性Wistar大鼠，實驗前禁食18h。快速犧牲大鼠，制備近端結(jié)腸縱形肌肌條，在灌流肌槽中孵育并記錄肌條自發(fā)收縮活動。以平滑肌肌條張力變化為指標(biāo)，分別觀察經(jīng)PDTC（NF—κB的阻斷劑）和SMT（iNOS的阻斷劑）預(yù)處理后，酒精對結(jié)腸縱形肌

3、肌條運動的影響，用Western blot技術(shù)測定胞漿中iNOS和ⅠκB表達(dá)量，以及NF—κB在胞核中的表達(dá)量，免疫組織化學(xué)的方法定位結(jié)腸內(nèi)表達(dá)iNOS的細(xì)胞，NO試劑盒測定結(jié)腸組織NO釋放量。所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，采用單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，以P<0．05為顯著性差異界值。 結(jié)果：①酒精（8．7×10—4M）明顯抑制離體結(jié)腸縱型肌肌條的自發(fā)收縮活動。加入酒精后，記錄2～4分鐘，7～9分鐘，12～14分鐘和17～

4、19分鐘，肌條張力的R值從1降低到0．90±0．02，0．87±0．02，0．89±0．03 and0．87±0．01。②灌流液中分別加入PDTC（10—2M）（NF—κB的阻斷劑）或SMT（10—3M）（選擇性iNOS拮抗劑）后，再加入同樣劑量的酒精，酒精對結(jié)腸肌條運動的抑制作用明顯減弱。③酒精（0．17×10—3M—1．30×10—3M）上調(diào)iNOS的表達(dá)，其中以8．7×10—4M的酒精作用最明顯。PDTC（10—2M）明顯抑制酒精

5、（8．7×10—4M）對iNOS的表達(dá)的上調(diào)作用。④酒精（8．7×10—4M）增加胞核中NF—κB的表達(dá)量，但減少胞漿中ⅠκB的表達(dá)量。PDTC逆轉(zhuǎn)酒精的這種作用。⑤免疫組化發(fā)現(xiàn)iNOS在結(jié)腸肌間神經(jīng)叢中表達(dá)。⑥正常大鼠結(jié)腸中NO含量為1．112±0．128μmol/g，加入酒精后20分鐘，N0含量增加為7．194±0．497μmol/g（P<0．05，n=6），PDTC預(yù)處理后再加入酒精，結(jié)腸中N晗量降為3．267±0．314μmol