Cdk3在結腸癌中的表達及其作用機制研究.pdf

1、本文探討Cdk3在結腸癌變過程中的演變規(guī)律，以及在結腸癌中的異常表達，明確Cdk3通過介導AP-1活性升高促進細胞惡性轉(zhuǎn)化而參與細胞癌變的作用機制。文中明確Cdk3在結腸癌組織中的表達，用免疫組織化學和原位雜交的方法檢測22例結腸癌組織、22例結腸腺瘤組織、24例結腸息肉組織中的Cdk3蛋白和mRNA的表達；為探討Cdk3在癌變中的生物學功能，將H-ras、Cdk3和c-Jun等質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至3T3細胞，用細胞平板集落形成實驗研究Cdk3過

2、表達促進H-ras介導的細胞惡性轉(zhuǎn)化。探討Cdk3參與癌變可能的分子機制，將Cdk3、Cdk2和AP-1等質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至HEK293細胞，用熒光酶報道基因分析的方法檢測AP-1活性，明確Cdk3促進AP-1活性升高. 1.免疫組織化學檢測顯示，在顯微鏡下Cdk3蛋白在結腸息肉組織、結腸腺瘤組織、結腸癌組織中的表達呈核-漿型，以胞漿為主。圖象分析結果顯示：結腸癌組織中Cdk3蛋白的平均光密度(0.80±0.36)明顯高于結腸腺瘤組織

3、(0.48±0.22)和結腸息肉組織(0.25±0.13)(P<0.05)，結腸腺瘤組織中的平均光密度明顯高于結腸息肉組織(P<0.05)。 2.mRNA原位雜交表明，在顯微鏡下Cdk3 mRNA在結腸息肉組織、結腸腺瘤組織、結腸癌組織中表達呈核一漿型，以胞漿為主。圖象分析結果顯示：結腸癌組織中Cdk3 mRNA的平均光密度(0.26±0.08)與結腸腺瘤組織(0.25±0.04)和結腸息肉組織(0.33±0.07)之間無顯著性

4、差異(P>0.05)，但是在顯微鏡下觀察，結腸癌組織中Cdk3 mRNA表達強于結腸腺瘤組織和結腸息肉組織，提示Cdk3在結腸癌變中可能具有重要作用。 3.在細胞平板集落形成實驗中，轉(zhuǎn)染H-ras+Cdk3細胞平板集落數(shù)(53±12.7)LP,僅轉(zhuǎn)染H-ras(34±14.7)明顯增多(P<0.05)，轉(zhuǎn)染H-ras+Cdk3+c-Jun的細胞集落數(shù)(115±25.3)在各組中是最高的，轉(zhuǎn)染H-ras+Cdk3+c-Jun-Mu

5、tant的細胞集落數(shù)(52±8.5)LL轉(zhuǎn)染H-ras+Cdk3+c-Jun明顯減少(P<0.05)。這些結果表明Cdk3通過c-Jun促進細胞集落形成。 4.轉(zhuǎn)染Cdk3組AP-1相對活性(11.87±3.48)與轉(zhuǎn)染Cdk3-DN組(0.99±0.18)、轉(zhuǎn)染Cdk2組(0.97±0.31)和對照組(1.27±0.35)相比明顯升高(P<0.05)，轉(zhuǎn)染Cdk3+cyclin C組AP-1相對活性(18.12±2.14)與轉(zhuǎn)