轉(zhuǎn)錄因子NFATc3在胰島β細(xì)胞增殖和功能中作用的研究.pdf

1、目的:探討轉(zhuǎn)錄因子NFATc3在調(diào)節(jié)胰島β細(xì)胞增殖和功能中的作用及其相關(guān)機(jī)制。
　　方法:利用RT-qPCR技術(shù)、Western Blot技術(shù)和免疫組化技術(shù)檢測(cè)高脂喂養(yǎng)對(duì)NFATc3在小鼠胰島中表達(dá)的影響。利用NFATc3的腺病毒感染MIN6細(xì)胞株，用BrdU染色法檢測(cè)過(guò)表達(dá)NFATc3對(duì)MIN6細(xì)胞株增殖的影響。用ELISA法檢測(cè)過(guò)表達(dá)NFATc3對(duì)MIN6細(xì)胞株葡萄糖刺激胰島素分泌的影響。利用NFATc3的腺病毒感染小鼠胰島細(xì)

2、胞，用RT-qPCR技術(shù)檢測(cè)過(guò)表達(dá)NFATc3后與β細(xì)胞功能相關(guān)的基因的變化。用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)高脂喂養(yǎng)的NFATc3基因敲除小鼠胰島β細(xì)胞增殖情況和與胰島β細(xì)胞功能相關(guān)的基因的變化。
　　結(jié)果:(1)在高脂喂養(yǎng)的小鼠胰島中NFATc3 mRNA和蛋白水平顯著下降。
　　(2)在MIN6細(xì)胞株中過(guò)表達(dá)NFATc3能增加細(xì)胞周期蛋白D1的表達(dá)并能促進(jìn)MIN6細(xì)胞株的增殖。
　　(3)在MIN6細(xì)胞株中過(guò)表達(dá)NFATc3能

3、增加PPARγ蛋白的表達(dá)，且能促進(jìn)MIN6細(xì)胞株葡萄糖刺激的胰島素分泌。
　　(4)在培養(yǎng)的小鼠胰島細(xì)胞中過(guò)表達(dá)NFATc3能激活一系列基因，如IRS-1、IRS-2、HNF-1α和FoxO1等。
　　(5)NFATc3基因敲除小鼠在高脂喂養(yǎng)后，較野生型小鼠胰島β細(xì)胞增殖受損。
　　(6)NFATc3基因敲除小鼠在高脂喂養(yǎng)后，與胰島β細(xì)胞功能相關(guān)的重要基因包括FoxA2、MafA表達(dá)減少。
　　結(jié)論:在代謝需求增