超聲輻照載維拉帕米微泡對神經(jīng)母細胞瘤多藥耐藥的逆轉(zhuǎn)作用研究.pdf

1、目的:探討超聲輻照載維拉帕米(Verapamil,VER)微泡逆轉(zhuǎn)神經(jīng)母細胞瘤多藥耐藥的作用及機制。
　　 方法:制備聚乳酸羥基乙酸(Poly lactic-co-glycolic acid,PLGA)微泡及載維拉帕米聚乳酸羥基乙酸(VER-PLGA)超聲微泡造影劑；通過長春新堿(Vincristine,VCR)多次小劑量遞增誘導(dǎo)法建立神經(jīng)母細胞瘤細胞耐藥株(SK-N-SH/VCR),并檢測其耐藥性；根據(jù)處理因素不同分組:A:空

2、白對照組(SK-N-SH/VCR培養(yǎng)組)、B:SK-N-SH/VCR+VER(50μg/ml)組、C:SK-N-SH/VCR+VER(250μg/ml)組、D:SK-N-SH/VCR+超聲輻照組、E:SK-N-SH/VCR十PLGA微泡+超聲輻照組、F:SK-N-SH/VCR+VER-PLGA微泡(VER50μg/ml)+超聲輻照組。各組處理完后48h,利用RT-PCR和免疫細胞化學(xué)染色法(immunohistochemistry,IH

3、C)從基因和蛋白水平檢測各組細胞中MDR1基因及P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表達水平,評估VER在不同處理組中逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞耐藥的效果。
　　 結(jié)果:1.成功制備PLGA及VER-PLGA超聲微泡造影劑,微泡造影劑外觀呈白色粉末狀,用生理鹽水稀釋溶解后為乳白色混懸液。普通光學(xué)顯微鏡觀察與激光測徑儀檢測微泡大小均勻,分散程度好,包封率為32％,載藥量1.4％。2.成功建立神經(jīng)母細胞瘤耐藥株SK-N-SH/V

4、CR,MTT法證實其對不同化療藥物的耐藥倍數(shù)是野生株的2.3-5.4倍；3.IHC證實耐藥株高表達P-gp；4.RT-PCR及免疫組化法檢測發(fā)現(xiàn)多藥耐藥基因(Multidrug resistance gene1,MDR1)在F組中的光密度值及P-gp表達水平較其它組明顯降低(P＜0.05):說明超聲輻照能促進VER-PLGA微泡逆轉(zhuǎn)SK-N-SH/VCR的耐藥性,并降低P-gp在耐藥株中的表達(P＜0.05)；同時減少大劑量VER產(chǎn)生的