潤燥消痰散結方對燥邪干預S-,180-肉瘤生長的作用機理研究.pdf

1、目的： 通過建立燥邪干預腫瘤模型，觀察燥邪對腫瘤發(fā)生發(fā)展的影響；運用潤燥消痰散結方進行干預，運用免疫組織化學和分子生物學技術探討其對TNF-α、IL-8、VEGF、ICAM-1的調控作用，及潤燥消痰散結方對燥邪干預下小鼠S<,180>肉瘤生長的影響及其可能作用機理。 方法： 1.30只昆明小鼠隨機分為3組：正常對照組、單純腫瘤組、燥邪腫瘤組，正常對照組、單純腫瘤組每日生理鹽水0.4ml灌胃，燥邪腫瘤組每日甲狀腺素

2、片藥液0.4ml灌胃共2周，320mg·kg<'-1>·d<'-1>。第7日測痛閾驗證燥邪干預模型。第8天單純腫瘤組、燥邪腫瘤組接種S<,180>肉瘤瘤株至小鼠右前腋下，建立燥邪干預腫瘤模型。第4周后犧牲動物剖取瘤塊稱重。行HE染色，對腫瘤進行病理診斷。實驗期間觀察小鼠營養(yǎng)情況，檢查小鼠肛溫，腫瘤生長變化。 2.50只昆明小鼠隨機分為5組：單純腫瘤組、燥邪腫瘤組、喃氟啶組、消痰散結組、潤燥消痰組。單純腫瘤組每日生理鹽水0.4ml

3、灌胃，其他組每日甲狀腺素片藥液0.4ml灌胃(劑量同上)。第8天各組接種S<,180>肉瘤。種瘤后，除單純腫瘤組外其他組繼續(xù)每日上午定時甲狀腺素片藥液(同前)，連續(xù)1周。 種瘤48小時后喃氟啶組下午定時給予喃氟啶稀釋液0.4ml(5.85mg/ml)，每日1次×3周；消痰散結組、潤燥消痰組下午定時給予消痰散結方、潤燥消痰散結方各0.4ml灌胃，每日一次，給藥為期3周。觀察小鼠全身情況，小鼠痛閾變化，腫瘤生長變化。 3.第

4、4周實驗結束時犧牲動物，剖取瘤塊稱重，計算瘤體積、抑瘤率。行HE染色，對腫瘤進行病理診斷。 4.取瘤組織行EnVision免疫組織化學檢測，比較腫瘤細胞TNF-α、VEGF、ICAM-1等蛋白的表達情況。 5.取瘤組織行ELISA法檢測IL-8水平。 結果： 1.成功建立腫瘤燥邪干預動物模型。給予燥邪干預后，燥邪干預的小鼠逐漸出現躁動不安，皮毛光澤度差，肛溫升高及痛閾下降等。燥邪腫瘤組與單純腫瘤組、正常對

5、照組相比，肛溫有升高趨勢，痛閾顯著下降，具有統(tǒng)計學差異(p<0.05)；與單純腫瘤組比較，燥邪腫瘤組小鼠的生存狀態(tài)明顯惡化，肉眼觀腫瘤出現時間明顯早于單純腫瘤組，兩者比較有統(tǒng)計學差異(p<0.05)；腫瘤瘤重大于單純腫瘤組，兩者比較有統(tǒng)計學差異(p<0.05)。 2.給予藥物干預后：燥邪腫瘤組與單純腫瘤組相比，瘤重、瘤體積明顯增加，差異有統(tǒng)計學差異(p<0.05)；喃氟啶組、消痰散結組和潤燥消痰組瘤重與燥邪腫瘤組相比，瘤重、瘤體

6、積均明顯減小，差異有統(tǒng)計學差異(p<0.05)；潤燥消痰組、消痰散結組與喃氟啶組相比，瘤重、瘤體積減輕，抑瘤率增高，但三組間無統(tǒng)計學差異(p>0.05)。 3.各組TNF-α、ICAM-1、VEGF蛋白表達的結果如下：比較不同組間TNF-α的表達發(fā)現，燥邪腫瘤組瘤組織TNF-α蛋白表達比單純腫瘤組高，有統(tǒng)計學差異(p<0.00455)；潤燥消痰組和消痰散結組與燥邪腫瘤組相比，均出現表達的降低，有統(tǒng)計學差異(p<0.00455)，

7、喃氟啶組與燥邪腫瘤組相比無統(tǒng)計學差異(p>0.00455)；潤燥消痰組和消痰散結組與喃氟啶組比，表達降低，但無統(tǒng)計學差異(p>0.00455)；消痰散結組與潤燥消痰組相比無統(tǒng)計學差異(p>0.00455)。比較不同組間ICAM-1蛋白的表達發(fā)現，單純腫瘤組與燥邪腫瘤組相比無統(tǒng)計學差異(p>0.00455)；喃氟啶組、潤燥消痰組和消痰散結組與燥邪腫瘤組相比，均出現表達的降低，有統(tǒng)計學差異(p<0.00455)；喃氟啶組、消痰散結組之間無明

8、顯差異；潤燥消痰組和喃氟啶組、消痰散結組相比有統(tǒng)計學差異(p<0.00455)。比較不同組間VEGF蛋白的表達發(fā)現，單純腫瘤組與燥邪腫瘤組無統(tǒng)計學差異(p>0.00455)；潤燥消痰組和消痰散結組與燥邪腫瘤組相比，均出現表達的降低，有統(tǒng)計學差異(p<0.00455)，喃氟啶組與燥邪腫瘤組相比，無統(tǒng)計學差異(P>0.00455)；喃氟啶組與潤燥消痰組和消痰散結組相比，有統(tǒng)計學差異(P<0.00455)：消痰散結組與潤燥消痰組相比，無統(tǒng)計學

9、差異(p>0.00455)。 4.比較不同組間IL-8的蛋白含量表達發(fā)現：燥邪腫瘤組與單純腫瘤組相比，含量顯著升高，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。潤燥消痰組、消痰散結組與燥邪腫瘤組相比，含量顯著下降，有統(tǒng)計學差異(p<0.05)，喃氟啶組與燥邪腫瘤組相比，無統(tǒng)計學差異(p>0.05)：潤燥消痰組與喃氟啶組相比較，含量顯著下降，有統(tǒng)計學差異(p<0.05)，消痰散結組與喃氟啶組相比較無統(tǒng)計學差異(p>0.05)；潤燥消痰組與消痰散結組比較

10、含量顯著下降，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。 結論： 1.燥邪對小鼠S<,180>肉瘤的生長有明顯促進作用，惡化荷瘤小鼠的生存狀態(tài)。燥邪可能通過促進炎性因子TNF-α、IL-8蛋白的惡性表達而促進S<,180>肉瘤的發(fā)生發(fā)展。 2.潤燥消痰散結方具有明顯抗腫瘤作用，能夠明顯改善荷瘤鼠生存狀態(tài)，進一步提高消痰散結方的抑瘤率。主要通過下調腫瘤組織中炎性因子IL-8、粘附分子ICAM-1，同時下調TNF-α、VEGF蛋