磷酸肌酸鈉對小鼠移植性S-,180-肉瘤血管生成的作用及其機制研究.pdf

1、目的：探討磷酸肌酸鈉（Creatine Phosphate Sodium，CP）對小鼠移植性S180肉瘤血管生成的作用及其可能的機制。
　　 方法：選取60只健康雄性昆明小鼠，無菌條件下將S180肉瘤腹水瘤細胞接種到其右腋皮下，構建S180肉瘤小鼠模型。接種次日，將小鼠隨機分為4組：生理鹽水對照組、CP低、中、高劑量組，每組15只，開始腹腔注射給藥，低、中、高劑量CP組分別予以磷酸肌酸鈉200mg/kg/d、400mg/kg/d

2、、800mg/kg/d，對照組予以生理鹽水，腹腔注射，每只0.2ml，連續(xù)給藥7天，第10天脫頸椎法處死小鼠，剝?nèi)×鲶w稱重，計算抑瘤率。流式細胞術測定腫瘤組織金屬蛋白酶組織抑制因子-2（tissue inhibitors of metalloproteinases，TIMP-2）及基質金屬蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2，MMP-2）蛋白的表達；免疫組化檢測腫瘤組織血管內(nèi)皮生長因子（vascular en

3、dothelial growth factor，VEGF）、堿性成纖維細胞生長因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）蛋白的表達及微血管密度（microvasvular density，MVD）；采用半定量RT-PCR方法檢測移植瘤組織中VEGFmRNA、bFGF mRNA的表達水平。
　　 結果：1瘤重及抑瘤率：對照組瘤重為（3.65+0.22）g；CP低劑量組瘤重為（3.48±0.20）

4、g，抑瘤率為4.66％；CP中劑量組瘤重為（3.43±0.23）g，抑瘤率為6.03％；CP高劑量組瘤重為（2.97±0.10）g，抑瘤率為18.63％；對照組、CP低、中劑量組三組之間瘤重比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；CP高劑量組分別與對照組、CP低、中劑量組瘤重比較，小鼠移植性肉瘤重量減小，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。2流式細胞術檢測CP對移植瘤組織中TIMP-2、MMP-2蛋白表達的影響：對照組、CP低劑量組、CP中

5、劑量組、CP高劑量組TIMP-2蛋白表達均道值分別為276.59±7.96、284.45±3.76、286.32±10.41、308.90±14.50。對照組、CP低劑量組、CP中劑量組、CP高劑量組MMP-2蛋白表達均道值分別為386.47±2.25、382.41±5.08、378.52±8.89、323.10±9.27：CP低、中劑量組和對照組三組之間比較，TIMP-2蛋白的表達量差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），MMP-2蛋白表達

6、差異亦無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。CP高劑量組分別與對照組、CP低、中劑量組相比，TIMP-2蛋白的表達量升高，MMP-2蛋白的表達量降低，差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。3應用免疫組化法檢測各組腫瘤組織內(nèi)VEGF、bFGF。及MVD的表達水平：對照組、CP低劑量組、CP中劑量組、CP高劑量組VEGF蛋白表達值分別為4.67±0.48、4.47±0.64、4.33±0.72、3.07±0.59；對照組、CP低劑量組、CP中劑量組

7、、CP高劑量組bFGF蛋白表達值分別為4.00±0.76、3.80±0.77、3.60±0.74、3.00±0.53；對照組、CP低劑量組、CP中劑量組、CP高劑量組MVD值分別為15.20±1.08、14.80±0.94、14.53±0.92、11.73±1.38；CP低、中劑量組和對照組三組之間比較，VEGF和bFGF的蛋白表達差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；CP高劑量組分別與對照組、CP低、中劑量組相比，VEGF蛋白表達量下降（

8、P<0.01）、‘bFGF的蛋白表達量亦下降（P<0.05），差異有統(tǒng)計學意義。CP低、中劑量組和對照組三組之間比較，MVD值差異無統(tǒng)計學意義（P<0.05）；CP高劑量組分別與對照組、CP低、中劑量組相比，MVD值降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。4采用半定量RT-PCR檢測各組腫瘤組織內(nèi)VEGFmRNA、bFGF mRNA的表達水平：對照組、CP低劑量組、CP中劑量組、CP高劑量組VEGFmRNA表達相對值分別為0.3898±

9、0.0025、0.3813±0.0114、0.3783±0.0089、0.3238±0.1115；對照組、CP低劑量組、CP中劑量組、CP高劑量組bFGFmRNA表達相對值分別為0.1602±0.0059、0.1556±0.0038、0.1548±0.0041、0.1393±0.0029。CP低、中劑量組和對照組三組之間比較，VEGFmRNA和bFGFmRNA的表達量均無統(tǒng)計學差異（P>0.05）；CP高劑量組分別與對照組、CP低、中劑

10、量組相比， VEGFmRNA、bFGFmRNA表達量均減少，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。
　　 結論：1高劑量CP對小鼠移植性S180肉瘤的增殖具有抑制作用，低、中劑量的CP對小鼠移植性S180肉瘤的增殖無明顯影響。2高劑量CP可下調(diào)小鼠移植瘤中MMP-2蛋白的表達、上調(diào)TIMP-2蛋白表達，低、中劑量的CP對MMP-2、TIMP-2蛋白的表達無明顯影響。3高劑量CP可下調(diào)小鼠移植瘤中VEGFmRNA、bFGF mRNA