紅花、當(dāng)歸和生側(cè)柏葉煎劑對(duì)鼠毛囊生長(zhǎng)影響的體外研究.pdf

1、本文研究目的：通過小鼠觸須毛囊游離器官培養(yǎng)模型，研究不同濃度的紅花、當(dāng)歸、生側(cè)柏葉三味中藥混合煎劑和單味煎劑對(duì)體外培養(yǎng)的小鼠觸須毛囊毛發(fā)生長(zhǎng)的影響；采用乳鼠背部皮膚毛囊球部細(xì)胞體外培養(yǎng)的方法，研究上述中藥對(duì)小鼠毛囊球部細(xì)胞生長(zhǎng)活力的影響。 研究材料：動(dòng)物來(lái)源周齡4～6周的C57BL/6J近交系小鼠，出生4d的C57BL/6J近交系乳鼠，均由浙江大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。 中藥煎劑的制備：川當(dāng)歸、藏紅花、山東生側(cè)柏葉由浙江省中

2、醫(yī)藥研究院基礎(chǔ)研究所提供，蒸餾水浸泡后，用陶瓷煎鍋煮，再以WilliamsE培養(yǎng)液稀釋獲得各種濃度的三味中藥混合煎劑與單味煎劑。 實(shí)驗(yàn)方法： 1、小鼠觸須毛囊器官培養(yǎng)的建立：在立體解剖顯微鏡下分離取得小鼠觸須毛囊，用毛囊培養(yǎng)液進(jìn)行游離毛囊器官培養(yǎng)，作為對(duì)照組；毛囊培養(yǎng)液基礎(chǔ)上再加入各種濃度的中藥煎劑作為實(shí)驗(yàn)組。顯微鏡下觀察各組毛囊毛發(fā)生長(zhǎng)情況。 2、小鼠毛囊球部細(xì)胞體外培養(yǎng)：出生4d的C57BL/6J乳鼠，在無(wú)菌

3、條件下取其背部整層皮膚，采用兩步酶(0.5％分離酶與0.2％I型膠原酶)消化法分離取得純度較高的毛囊球部細(xì)胞，接種于含有上述中藥濃度的毛囊培養(yǎng)液與僅有毛囊培養(yǎng)液的96孔板，MTT法檢測(cè)對(duì)照組與各中藥組的吸光度A值。 研究結(jié)果： 1、培養(yǎng)第7天，1.5×10-5g/ml、1.5×10-6g/ml、1.5×10-7g/ml混合煎劑組的平均毛囊生長(zhǎng)長(zhǎng)度大于對(duì)照組(P＜0.05)，其中1.5×10-5g/ml組的毛囊生長(zhǎng)長(zhǎng)度大于

4、1.5×10-7g/ml組(P＜0.05)，濃度過高(1.5×10-4g/ml)組與濃度過低(1.5×10-8g/ml)組以及各單味煎劑組的毛囊生長(zhǎng)長(zhǎng)度與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P＞0.05)。 2、培養(yǎng)第72小時(shí)與第5天，1.5×10-5g/ml、1.5×10-6g/ml、1.5×10-7g/ml中藥混合煎劑組的吸光度A值大于對(duì)照組(P＜0.05)，濃度過高(1.5×10-4g/ml)組與濃度過低(1.5×10-8g/ml)組

5、以及各中藥單味煎劑組的吸光度A值與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P＞0.05)，其中1.5×10g-5/ml混合組的吸光度A值與1.5×10-7g/ml混合組相近(P＞0.05)。 研究結(jié)論： 1、紅花、當(dāng)歸、生側(cè)柏葉三味中藥混合煎劑對(duì)體外培養(yǎng)的小鼠觸須毛囊生長(zhǎng)起促進(jìn)作用，可促進(jìn)乳鼠背部皮膚毛囊球部細(xì)胞增殖。 2、紅花、當(dāng)歸、生側(cè)柏葉三味中藥單味煎劑對(duì)體外培養(yǎng)的小鼠觸須毛囊生長(zhǎng)及乳鼠背部皮膚毛囊球部細(xì)胞增殖無(wú)明顯作用。