他克莫司對小鼠毛囊生長周期、體外培養(yǎng)人毛囊及人毛乳頭細胞的影響.pdf

1、他克莫司屬大環(huán)內(nèi)脂類，通過抑制鈣調(diào)蛋白磷酸酶從而抑制細胞免疫，是肝臟及腎臟移植患者的首選免疫抑制藥物。本藥抑制T細胞的活化作用以及依賴T輔助細胞的B細胞的增生作用，也會抑制如白介素-2、白介素-3及γ-干擾素等細胞因子的生成與白介素-2受體的表達。近年來國內(nèi)外陸續(xù)有研究發(fā)現(xiàn)他克莫司有著直接促進毛發(fā)生長的作用。Ward等報道系統(tǒng)使用他克莫司能引起患者睫毛粗長。Yamamoto等研究顯示局部外用他克莫司能直接促進小鼠及倉鼠毛囊生長，涂藥第1

2、6天這種促進作用依然存在。吳賢杰等研究顯示0.003～0.3mg/L濃度范圍內(nèi)的他克莫司能促進離體小鼠觸須毛囊生長。但是他克莫司這種直接促進毛囊生長的作用機制目前尚不明確，推測可能與某些生長因子、直接或間接抑制毛囊凋亡等有關(guān)。 毛囊是一種結(jié)構(gòu)復(fù)雜的皮膚附屬器官，它由上皮(毛母質(zhì)與外根鞘)和真皮(毛乳頭與結(jié)締組織鞘)兩大部分組成，經(jīng)歷生長期、退行期和休止期的周期性循環(huán)。毛乳頭細胞是一群位于毛囊基底部的真皮源性細胞，對于誘導(dǎo)和維持毛

3、囊的形態(tài)發(fā)生、周期性循環(huán)是必不可少的，其大小(由毛球部基質(zhì)細胞數(shù)量決定)決定了毛囊的大小和生長期的長短。已經(jīng)知道毛乳頭細胞能分泌多種細胞因子，如胰島素樣生長因子(IGF)-1、成纖維細胞生長因子(FGF)-7、肝細胞生長因子(HGF)、血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)、腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細胞介素(IL)-1、白細胞介素(IL)-6等。最近有研究發(fā)現(xiàn)VEGF能作用于毛囊，在毛囊的周期性循環(huán)和毛發(fā)生長中起著重要作用。研究發(fā)現(xiàn)抗V

4、EGF的中和性抗體可以阻斷重組VEGF和毛乳頭起源的VEGF的活性，從而證實VEGF是毛乳頭細胞的一種自分泌生長因子。目前認為VEGF調(diào)節(jié)毛囊生長的機制主要在以下兩方面：①促進毛乳頭細胞的增殖和遷移②誘導(dǎo)毛囊周圍血管形成。最新研究證實HGF是促進毛發(fā)生長的重要生長因子，它可能在毛囊發(fā)育及毛囊周期中起著非常重要的作用。在體外培養(yǎng)的毛乳頭細胞能自分泌HGF，它能刺激細胞DNA合成，使毛干延長。給毛囊處于生長期的小鼠局部注射HGF能阻止生長期

5、毛囊進入退行期。VEGF及HGF在毛囊的生長期表達明顯，而在退行期、休止期則明顯減弱或消失，故它們對毛囊生長周期和毛發(fā)生長具有正向調(diào)節(jié)作用。本文主要包括以下三方面的內(nèi)容： 1.采用C57BL/6小鼠作為毛囊周期研究模型，觀察他克莫司對小鼠脫毛后毛囊周期影響及其機制。C57BL/6小鼠在6～8周飼養(yǎng)良好狀態(tài)下，所有毛囊由生長期進入休止期，而且在生理狀態(tài)下不再自發(fā)進入生長期。在人工脫毛后，毛囊可被誘導(dǎo)依次進入生長期、退行期、休止期，

6、這個周期活動與小鼠毛發(fā)自然周期無顯著差異。該系小鼠軀干皮膚的黑素細胞只存在于毛囊中，并且僅僅在生長期合成黑色素并傳遞給角質(zhì)形成細胞，使皮膚表現(xiàn)為黑色；退行期黑素形成減少，皮膚為灰色；休止期黑素合成完全停止，皮膚顯示為粉紅色，因此可以簡單地以小鼠脫毛后皮膚顏色變化來判斷毛發(fā)周期的變化。在組織學(xué)上，Chase等指出C57BL/6小鼠毛發(fā)生長期約17～19天，可根據(jù)形態(tài)學(xué)特點分為6個亞期。退行期比較短暫，表現(xiàn)為毛干末端呈杵狀，毛乳頭緊縮，毛囊

7、下段退化，和毛乳頭間形成一個上皮細胞索。隨后該細胞索收縮，毛乳頭上移至立毛肌附著處水平，毛囊進入休止期。本試驗用上述C57BL/6小鼠毛發(fā)周期動物模型，研究他克莫司對小鼠毛囊周期影響。動物按隨機化原則分為他克莫司組(實驗組)、凡士林組(陰性對照組)、米諾地爾組(陽性對照組)。結(jié)果顯示在第5天外涂他克莫司及米諾地爾的小鼠大多數(shù)毛囊呈生長期Ⅴ狀態(tài)，而凡士林組大多數(shù)毛囊屬生長期Ⅲ。脫毛后第5天他克莫司組及米諾地爾組小鼠背部皮膚VEGF和HGF

8、表達顯著，凡士林組則沒有VEGF和HGF表達。提示他克莫司可能是通過促進VEGF和HGF表達從而使毛干生長速度加快，加速其進入生長期Ⅴ。 2.他克莫司對體外培養(yǎng)人毛囊生長的影響。本試驗旨在探討他克莫司對體外培養(yǎng)人毛囊生長的影響，研究其促毛發(fā)生長的方式。充分消毒頭皮標本，于真皮與皮下交界處切開，順毛干生長方向從皮下拔取毛囊，在解剖鏡下選擇完整的生長期毛囊隨機分到24孔板中。設(shè)單純Williams E培養(yǎng)基組、他克莫司0.00 1

9、mg/L、0.003 mg/L、0.006 mg/L、0.01 mg/L、0.03 mg/L、0.06 mg/L組及2％米諾地爾組。結(jié)果顯示他克莫司濃度在0.001～0.003mg/l時可顯著促進毛囊生長(P<0.05)，起促進毛發(fā)生長的濃度區(qū)間較窄。 3.他克莫司對體外培養(yǎng)人毛乳頭細胞增殖的影響。本部分實驗旨在觀察他克莫司對體外培養(yǎng)人毛乳頭細胞增殖的影響。采用兩步酶消化法分離純化毛乳頭細胞，貼壁后第1天細胞開始遷出呈現(xiàn)放射狀生