滋補脾陰方藥對脾陰虛癡呆大鼠不同腦區(qū)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激影響的研究.pdf

1、目的：阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)亦稱為老年癡呆，是一種常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，主要臨床表現(xiàn)為進行性記憶力減退，認知功能障礙以及人格改變等。AD的主要病理特征是，大腦皮質(zhì)和海馬的神經(jīng)細胞外出現(xiàn)β-淀粉樣蛋白(amyliod-β protein，Aβ)聚集形成的老年斑(senile plaque，SP)，及神經(jīng)細胞內(nèi)tau蛋白異常聚集形成的神經(jīng)纖維纏結(jié)(neurofibrillary tangles，

2、NFTs)。至今AD的發(fā)病機制還不是很清楚。近年來研究發(fā)現(xiàn)AD與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(endoplasmic reticulum，ER)功能異常有關(guān)。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)未折疊/錯誤折疊蛋白堆積，鈣離子失衡可引發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress，ERS)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通過未折疊蛋白反應(yīng)(unfolded protein response，UPR)糾正這些異常變化。過度的ERS導(dǎo)致細胞損害和死亡。其中葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(gluose

3、regulated protein 78，GRP78)、凋亡促進因子CCAAT/增強子結(jié)合蛋白同源蛋白(CCTTA/EBP homologous protein，CHOP)和活化轉(zhuǎn)錄因子4(activating transcription factor 4，ATF4)在ERS中分別起到重要的作用。對ERS的深入研究為阿爾茨海默病發(fā)病機制和防治提供了新的方向。滋補脾陰方藥(Zibu Piyin recipe，ZBPYR)是戰(zhàn)麗彬教授以清代

4、吳澄《不居集》的資成湯為基礎(chǔ)并結(jié)合多年實踐化裁而成，以培補后天、滋補脾陰為立方原則，針對脾陰虛證而設(shè)。本課題組以往研究顯示，ZBPYR具有顯著的神經(jīng)保護和抗腦衰老作用，且它對神經(jīng)元的保護作用與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)。本實驗將進一步研究脾陰虛癡呆大鼠各腦區(qū)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激情況及ZBPYR對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的作用，這對AD的防治具有重要意義。 方法： 1.將健康成年雄性SD大鼠隨機分為空白對照組、癡呆組、脾陰虛組、脾陰虛癡呆組和脾陰虛癡呆+ZB

5、PYR組5組，每組7只。 2.首先用復(fù)合因素建立脾陰虛證候模型，在此基礎(chǔ)上通過雙側(cè)海馬內(nèi)注射聚集態(tài)的Aβ1-40(5μg/μl)建立癡呆疾病(AD)模型，最終建立脾陰虛癡呆的證病結(jié)合模型。停止施加造模因素后，脾陰虛癡呆+ZBPYR組給予藥物治療。 3．通過RT-PCR方法檢測各組大鼠不同腦區(qū)GRP78、CHOP和ATF4 mRNA表達的變化情況。 4．通過免疫組織化學(xué)方法檢測各組大鼠不同腦區(qū)GRP78、CHOP蛋

6、白表達的變化情況。 結(jié)果： 1．RT-PCR結(jié)果顯示，分別與空白對照組、脾陰虛組比較，癡呆組和脾陰虛癡呆組大鼠海馬、紋狀體、大腦皮質(zhì)GRP78 mRNA表達水平明顯下調(diào)(P<0.05)；CHOP、ATF4 mRNA表達水平明顯上調(diào)(P<0.05)。與脾陰虛癡呆組比較，脾陰虛癡呆+ZBPYR組大鼠海馬、紋狀體、大腦皮質(zhì)GRP78 mRNA表達水平明顯上調(diào)(P<0.05)；CHOP、ATF4 mRNA表達水平明顯下調(diào)(P<0

7、.05)。 2．免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，分別與空白對照組、脾陰虛組比較，癡呆組和脾陰虛癡呆組大鼠海馬(CA1區(qū)，CA3區(qū)，DG區(qū))、大腦皮質(zhì)GRP78蛋白表達水平明顯下調(diào)(P<0.05)；CHOP蛋白表達水平明顯上調(diào)(P<0.05)。與脾陰虛癡呆組比較，脾陰虛癡呆+ZBPYR組大鼠海馬(CA1區(qū)，CA3區(qū)，DG區(qū))、大腦皮質(zhì)GRP78蛋白表達水平明顯上調(diào)(P<0.05)；CHOP蛋白表達水平明顯下調(diào)(P<0.05)。 結(jié)論