滋補脾陰方藥對脾陰虛糖尿病大鼠腦組織外周組織PDHE1α蛋白表達的影響.pdf

1、目的:糖尿病(diabetes mellitus，DM)，以慢性血糖水平增高為特征，其發(fā)病機制涉及胰島素分泌和（或）作用缺陷。糖尿病可引起多種慢性并發(fā)癥，中樞神經系統(tǒng)損害作為其中之一，逐漸受到重視。糖尿病相關認知下降(diabetes-associated cognitive decline，DACD)，也被稱作糖尿病腦病，臨床表現(xiàn)為逐漸出現(xiàn)的認知能力下降。糖尿病腦病的發(fā)病機制較為復雜，主要涉及腦血管的變化，胰島素信號的障礙、氧化應激，

2、非酶性蛋白糖基化和鈣穩(wěn)態(tài)的破壞等，確切機制尚不十分清楚。課題組以往研究通過對DACD大鼠海馬進行蛋白質組學分析，結果顯示與線粒體能量代謝密切相關的一個蛋白PDHE1α發(fā)生變化，提示DACD大鼠海馬線粒體可能發(fā)生能量代謝障礙。糖尿病在中醫(yī)學中屬于“消渴”病范疇，糖尿病腦病可被認為是消渴病合并健忘或呆病。糖尿病病機特點可概括為“陰虛為本，燥熱為標”，然中醫(yī)學認為脾為太陰，傷陰必及脾陰，所以脾陰虛是糖尿病病機的根本。現(xiàn)代研究表明，脾主運化的功

3、能與線粒體主持能量合成的這一功能類似且二者密切相關，所以脾陰虛時也相應的出現(xiàn)線粒體功能障礙。無論是脾陰虛呆癥，還是糖尿病腦病，二者共同的病理生理機制即線粒體能量代謝障礙。PDHE1α(pyruvate dehydr ogenase E1 alpha subunit)是丙酮酸脫氫酶復合體(pyruvate dehydrogenasecomplex，PDHc)的核心結構之一，它的作用是限速不可逆的催化丙酮酸脫氫脫羧轉化為乙酰輔酶A。糖的有氧

4、氧化通過PDHE1α與三羧酸循環(huán)、氧化磷酸化相聯(lián)系，可見PDHE1α在線粒體能量代謝中起到關鍵性作用。糖尿病時由于胰島素分泌不足或胰島素抵抗，可以使PDHc活性降低，丙酮酸的有氧氧化發(fā)生障礙而生成乳酸，乙酰輔酶A生成減低。乙酰輔酶A是三羧酸循環(huán)的底物，也是生成中樞神經遞質乙酰膽堿的重要來源，乙酰輔酶A來源減少不僅導致能源供應降低，同時神經遞質生成也減低，導致腦組織能量代謝水平下降，進而引起學習記憶障礙。滋補脾陰方藥(ZiBuPiYin

5、Recipe，ZBPYR)是戰(zhàn)麗彬教授根據吳澄《不居集》中的資成湯結合多年臨床實踐化裁而來。課題組以往研究顯示ZBPYR可能通過上調表達與線粒體能量代謝密切相關的蛋白PDHE1α而改善糖尿病腦病大鼠的學習和記憶能力，提示ZBPYR可能在改善腦組織線粒體能量代謝障礙方面存在作用。為了進一步探討滋補脾陰方藥對脾陰虛糖尿病大鼠認知功能的作用機制，我們建立脾陰虛糖尿病證病結合模型，應用ZBPYR干預，通過Western Blotting的方法探

6、討了ZBPYR對脾陰虛糖尿病大鼠腦組織（包括下丘腦、海馬、皮質）外周組織(肝、胃、空腸、回腸、胰腺)PDHE1α蛋白表達的影響，目的是為了從蛋白水平探討滋補脾陰方藥的作用機制，以期為糖尿病腦病的臨床治療提供新思路。
　　 方法:1.以往課題組已成功運用SPF級健康成年雄性SD大鼠隨機分為空白對照組、糖尿病組，脾陰虛組、脾陰虛糖尿病組和脾陰虛糖尿病+ZBPYR治療組，隨機血糖＞16.7mmol/L的大鼠確定為糖尿病模型，在此基礎上

7、通過疲勞過度加饑飽失常的復合因素造模的方法建立脾氣虛證模型，之后造模大鼠灌服傷陰藥，建立脾陰虛糖尿病證病結合模型。并已通過跳臺實驗和Morris水迷宮實驗進行行為學測試，行為學檢測結果已成功判定糖尿病組和脾陰虛糖尿病組大鼠的學習記憶能力降低。脾陰虛糖尿病+ZBPYR治療組大鼠給予ZBPYR干預。治療結束后大鼠斷頭取腦組織（下丘腦、海馬、皮質）及外周組織（肝、胃、空腸、回腸、胰腺）。
　　 2.采用Western Blotting

8、的方法觀察空白對照組、糖尿病組、脾陰虛組、脾陰虛糖尿病組，脾陰虛糖尿病+ZBPYR治療組等各組大鼠腦組織（下丘腦、海馬、皮質）及外周組織(肝、胃、空腸、回腸、胰腺)PDHE1α蛋白的表達。
　　 結果:WesternBlotting結果顯示糖尿病組(DM)、脾陰虛糖尿病組(piDM)大鼠皮質的PDHE1α表達低于空白對照組(Cont)(P＜0.05)，脾陰虛糖尿病+ZBPYR治療組(ZBPYR)大鼠與脾陰虛糖尿病組(piDM)相

9、比PDHE1α表達升高(P＜0.05)。脾陰虛組(pi)、脾陰虛糖尿病組(piDM)大鼠胃的PDHE1α表達低于空白對照組(Cont)(P＜0.05)，脾陰虛糖尿病+ZBPYR治療組(ZBPYR)與脾陰虛糖尿病組(piDM)相比PDHE1α表達升高(P＜0.05)。糖尿病組(DM)、脾陰虛組(pi）、脾陰虛糖尿病組(piDM)大鼠下丘腦、海馬、肝、空腸、回腸、胰腺的PDHE1α表達與空白對照組(Cont)比較均無統(tǒng)計學差異(P＞0.05